الفهرس 
Introduction and Review of literatureOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 206 |  |  |
| | | from | 206 | | |
Abstract
الحلبة الوصف النباتي الحلبة عشب حولي من فصيلة البقوليات يتراوح ارتفاعه ما بين 20- 60 سم. لها ساق جوفاء وتتشعب منه فروع صغيرة يحمل كل منها في نهايتها ثلاث أوراق مسننة طويلة، ومن قاعدة ساق الأوراق تظهر الأزهار الصفراء الصغيرة التي تتحول إلى ثمار على شكل قرون معقوفة طول كل قرن حوالي 10 سم وتحتوي على بذور تشبه إلى حد ما في شكلها الكلية وهي ذات لون أصفر مائل إلى الخضار تمت دراسة علمية على تأثير الحلبة على السرطان الخاص بالكبد في حيوانات التجارب وكانت النتيجة هبوطاً كبيراً لسرطان الكبد. تساعد على تقليل نسب البروتينات الدهنية منخفضة الكثافة (الكوليسترول الضار) والدهون الثلاثية و تحسن من وظائف الكلى وتقي من سرطان القولون وتساعد في تخفيف الالتهابات وتحسين الوظائف العامه في الجسم. هدفت الدراسة في هذه الرسالة الي عزل إنزيم اليورياز من بعض النباتات وقياس نشاطه ثم تنقية الإنزيم من النبات الأعلي نشاطا ثم قياس النشاط الإنزيمي في مستخلصات الأوراق لنباتات الحلبة والبسلة والترمس وأظهرت أن مستخلص نبات أوراق الحلبة أعلي نشاطا للإنزيم ولذلك تم إستخدام مستخلص أوراق الحلبة في تنقية الإنزيم ودراسة خصائصه ثم تثبيته علي بعض الدعامات الكيميائيه وكذالك دراسة تأثيره علي الخلايا السرطانيه والتي شملت :- سرطان الثدي و سرطان الكبد بالإضافة الي دراسة تأثيره علي الخلايا الغير مصابة. تم تنقية الإنزيم من أوراق الحلبه وكان النشاط النوعي النهائي من عمود السيفادكس ج - 200 هو 210 وحدة لكل مللي جرام بروتين وكانت إنتاجية الإنزيم من عملية التنقيه 6.6% في نهاية مراحل التنقيه علي السيفادكس ج - 200. تم تقدير الوزن الجزيئي للإنزيم بواسطة الفصل الكهربائي بولسطة SDS-PAGE وكان الوزن الجزيئي 43 kDa تم دراسة تأثير تركيزات مختلفه من اليوريا وكذلك متشابهات اليوريا مثل هيدروكسي يوريا وثيويوريا وتبين أن هذين المركبين قد ثبطا النشاط الإنزيمي بالمقارنة مع اليوريا وكانت قيم km (3.3, 2.5 , 1.5 ) للمركبات الثلاثة علي التوالي بينما كانت قيم السرعة القصوي Vmax (35, 22 , 14 ) وحدة لكل ملليجرام بروتين. بينت النتائج أن الرقم الهيدروجيني الأامثل هو 8 بينما درجة الحرارة المثلي 40 درجة مئويه. أظهرت النتائج أن الفترة الزمنية المثلي للتفاعل الإنزيمي كانت 15 دقيقه. تم دراسة تأثير مركبات البولي أول علي الثبات الحراري للإنزيم عند 60 درجة مئويه وتبين أن السوربيتول أفضل من المانيثول والإريثريتول حيث كان النشاط النسبي بعد 100 دقيقه هو 61% , 51%, 33% من النشاط الكنترول وكانت فترة نصف العمر للإنزيم246.198, 199.04, 142.911 دقيقه في وجود المركبات الثلاثة علي التوالي. تم دراسة تأثير مركبات الأنهيدريد مثل : أنهيدريد الستراكونك, أنهيدريد الفيثالك, أنهيدريد السكسينيك و أنهيدريد المالييك وتبين ان أنهيدريد الستراكونك هو افضل الأنهيدريدات في الحفاظ علي الثبات الإنزيمي يليه أنهيدريد المالييك ثم أنهيدريد السكسينيك وأنهيدريد الفيثاليك. تم دراسة تأثير 10 مللي مول تريهالوز علي الثبات الحراري للإنزيم عند 60 درجه مئويه وتبين أن التريهالوز أدي إلي ثبات الإنزيم بالمقارنة بالكنترول الذي لم يضاف إليه التريهالوز وتكررت الظاهرة في وجود ألبيومين مصل البقر. تم دراسة تأثير أيونات البوتاسيوم والنيكل والنحاس والمغنسيوم والمنغنيز والباريوم والزنك والرصاص في صورة أملاح الكلوريد وقد أبدت أيونات النيكل تحفيزا ملحوظا للنشاط الإنزيمي حيث كان النشاط النسبي 124% ولم يظهر أيون البوتاسيوم أي تأثير علي الإنزيم بينما أظهلرت بقية أيونات العناصرتأثيرا مثبطاً للنشاط الإنزيمي وخاصة أيونات الرصاص حيث كان النشاط النسبي في وجوده 23%. أدت إضافة الترايتون للإنزيم إلي زيادة النشاط الإنزيمي عند التركيزات المنخفضه من الترايتون إلي أن وصل أعلي قيمة عند 0.6% (v/v) ثم إنخفض النشاط الإنزيمي في التركيزات 0.8% و1% (v/v). إستحثت مركبات الأدينوزين نشاط إنزيم اليورياز وكان الأدينوزين ثلاثي الفوسفات الأكثر إستحثاثا يليه أدينوزين ثنائي الفوسفات ثم أحادي الفوسفات. بدراسة تأثير المذيبات العضوية المختلفة مثل الإيثانول والبروبانول والميثانول علي نشاط اليورياز تبين أن البروبانول الأكثر تثبيطا بينما كان الميثانول الأقل تثبيطا حيث كانت فترة نصف عمر الإنزيم في وجود الكحولات كالأتي : 116.1و100.9 و171.1 دقيقه للمركبات الثلاثه علي التوالي. تم دراسة تأثير التركيزات المختلفه من فوق أكسيد الهيدروجين وتبين أنه كلما زاد التركيز إنخفض النشاط النسبي حتي بلغ 16% وبلغت قيمة التركيز النصف مثبط الأقصى (IC50) 23.26%. بدراسة تأثير درجة الحرارة عند 4 درجات مئويه و25 درجة مئويه علي عملية الثبات الانزيمي تبين ان الانزيم أكثر ثباتا عند 4 درجات مئويه خلال 60 يوما حيث كانت فترة نصف عمر الإنزيم عند 4 درجات مئويه تساوي 54.02 دقيقه وكانت فترة نصف عمر الإنزيم عند 25 درجة مئوية 47.86 دقيقه. تم دراسة تأثير مركبات الكبريت والتي تشمل كلا من داي ثيوثريتول وثيوجليكولات والسيستين والجلوتاثيون المختزل علي نشاط اليورياز وتبين أن التركيز الأمثل لزيادة نشاط الإنزيم للدايثيوثريتول والثيوجليكولات والجلوتاثيون المختزل 60 ميكرومول بينما التركيز الأمثل للسيستين هو 80 ميكرومول. تم دراسة تأثير الهرمونات النباتيه والتي تشمل الكينيتين وحمض الجبريليك عند تركيزات مختلفه عي نشاط اليورياز وتبين ان الكينيتين الأكثر إستحثاثا لنشاط الإنزيم وخاصتا عند 150 ميكرومول. تم دراسة تأثير بعض كواشف المجموعات الفعالة في الإنزيم والتي شملت كلوريد الدانسيل و ن- بروموسكسينيميد و داي ايثايل بيروكربونات و ن- ايثيل ميليميد وتبين أن هذه المركبات قد أظهرت تثبيط واضحاً علي نشاط اليورياز وإعتمد التثبيط علي تركيز الكاشف وقد أوحي هذا التثبيط إلي أهمية كل من اللايسيل والتربتوفينايل والهيستيدايل والسلفهيدرايل كمجموعات فعالة لعمل الانزيم وكانت قيم التركيز المثبط لنصف نشاط الإنزيم ( (IC50للمركبات الأربعه هي 6.81 و 1.57 و 4.95 و4.68 مللي مول للمركبات الأربع علي التوالي. تم تثبيت الأنزيم علي ثلاثة دعامات شملت الكيتين و ألجينات الكالسيوم و الكاراجينان وأظهرت الكاراجينان أعلي كفاءة في تثبيت انزيم اليورياز والتي بلغت 85% ويلية الكيتين 69.4% ثم ألجينات الكالسيوم 63.8%. بدراسة تأثير زمن التثبيت للإنزيم علي الكارجينان تبين أن الفترة الزمنيه الأمثل لكفاءة تثبيت الإنزيم كانت عند 8 ساعات وبدراسة تأثير الجلوتارألدهيد علي كفاءة التثبيت لليورياز علي الكارجينان تبين أن التركيز الأمثل هو 9%(v/v). بدراسة تأثير تركيز البروتين الإنزيمي علي كفاءة التثبيت علي الكاراجينان تبين أن التركيز الأمثل 35 مللي جرام لكل جرام من الإنزيم المنقي من الكارجينان. أظهرت النتائج أن الرقم الهيدروجيني الأمثل للإنزيم المثبت علي الكارجينان هو 8 ودرجة الحرارة المثلي 50 درجة مئويه. تم إعادة إستخدام الإنزيم المثبت سبع دورات متتاليه وإحتفظ الإنزيم المقيد علي 36.8% من نشاطه في الدورة السابعه ولهذا يتم إستخدام الإنزيم المثبت بأكثر من مرة وهذا له أهمية إقتصادية كبيرة. تم دراسة تأثير الإنزيم النقي علي بعض الخلايا السرطانيه والتي شملت خلايا الثدي وخلايا الكبد وبالمقارنه مع الخلايا الغير مصابه وتبين فاعلية الإنزيم في القضاء علي الخلايا السرطانيه معتمدا علي تركيز الإنزيم بينما كان تأثير الإنزيم النقي علي الخلايا الغير مصابه تأثيرا منخفضا وكانت قيم التركيز المثبط لنصف نشاط الإنزيم ( (IC50للتركيزات المثبطه هي 337.21 في حالة خلايا الثدي و 45.233 في حالة خلايا الكبد وأكبر من 100 في حالة الخلايا المصابه مما يوحي الي امكانية استخدام الانزيم كمضاد للخلايا السرطانيه المذكورة وهذا يحتاج لمزيد من الدراسه. من الواضح أن اليورياز المنقى من نبات التريجونيلا (الحلبة) أظهر نشاطًا مضادًا للسرطان ضد كل من خلايا سرطان الثدي والكبد بقيم IC50 تبلغ 46.27 و 25.33 ملم على التوالي. ومع ذلك، أظهر اليورياز المنقى تأثيرًا طفيفًا على خط الخلية الطبيعي المسجل IC50 > 100. توصية : توصي نتائج هذه الدراسة بإستخدام إنزيم اليورياز المنقي من النباتات الأخرى بعدة طرق مختلفة وتطبيقه على أنواع مختلفة من الخلايا السرطانية. لقد قمنا بدراسته في المختبر، والآن بعد التطبيق نتطلع إلى تطبيقه على الجسم الحي واستخدامه في صناعة أدوية السرطان لأنه أثبت فعاليته الكبيرة بسبب تأثيره على حياة الخلايا وإنهائها، وفقا للنتائج المقدمة من خلال هذه الدراسة.