الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 97 |  |  |
| | | from | 97 | | |
Abstract
يعـتبر محصول البطاطس من المحاصيل الاقتصادية الهـامة حيث يحتل 14 في الإنتاج العالمي بعد محصول القـمح والـذرة والأزر. تقدر المساحة المنـزرعة لمحـصول البطاطـس في مصر بحوالي ثمـانية عشر الف فـدان تزرع طول السنة فى ثلاثة عروات (الشتاء- الربيع- الصيف) حيث يبـلغ متوسط محصول الفدان حوالى عشرةاطنان كما يبلغ الإنتاج الكلى لمحصول البطاطس فى مصر اثنين ونصف مليون طن سنويا. يوفر محصول البطاطس العملة الصعبة لمصر حيث يتم تصدير محصول العروة الشتوية لدول الاتحاد الأوروبي. و من اخطر المشاكل التي تواجه تصدير محصول البطاطس لدول الاتحاد الأوروبي هي الإصابة بمرض العفن البنى والمسبب له بكتيريا Ralstonia solanacearum.
يعـتبر نبات البطاطس احد العـوائل المفـضلة للعديد من مسببات الأمراض الفطرية والفيروسية والبكتيرية. يؤدى مرض العفن البنى المسبب له بكتيريا (R. solanacearum) الى فقد كبير في إنتاج البطاطس ومن ثم المنتجات الغذائية التى تعتمد على محصول البطاطس فى مصر.
تنتشر بكتيريا ((R. solanacearum بكثافة عالية في المناطق الاستوائية وشبه الاستوائية (معتدلة) حيث تسبب ذبول بكتيري لأكثر من مائتي نوع من النباتات المعروفة، كما تواجه زراعة البطاطس على مستوى العالم العديد من المشاكل بسبب مرض العفن البنى.
تتحول بكتيريا ((R. solanacearum من الـطور الممرض (virulent) لطور الغير ممرض (a virulent) فيما يعرف بظاهرة التحول الشكلي أو المظهري (phenotypic conversion) ويحكمها معقد وراثي به العديد من عوامل النسخ (Transcription factors) و أيضآ العديد من عناصر نقل الإشارات بين البكتيريا والنبات (Signal transduction elements) .
تتميز بكتريا R. solanacearum بانـها سالبة الجرام ، عـصوية الشكل ، ليـس لها القـدرة على تكـوين كبسولة خـارجـية ، هوائية. وعلى الرغم من ان R. solanacearum بكتيريا تعيش في التربة (Soil borne) إلا إنها تصيب الكثير من العوائل النباتية عبر الجروح أو عن طريق الشعيرات الجذرية الضعيفة الموجودة في الجذور الجانبية. حيث تكون مستعمرة داخل القشرة الجذرية تغزو الأوعية الخشبية ثم تنتشر سريعا في كامل النبات مسببة اصفرار ، تقزم ، ذبول وتحلل و ثم موت للنبات.
تقسم بكتيريا R. solanacearum طبقا للعائل ومصدر الكربون لخمسة سلالات فسيولوجية (Races) وخمسة طرز حيوية (Biovars) وغالبا ما ينتمى الطراز الحيوى 2 الى السلالة 3 (Race 3 ). وتتميز السلالة 3 بمدى عوائل محدود حيث تصيب فقط البطاطس والطماطم في الأراضي المصرية.
وكان الهدف الرئيسي لهذه الدراسة هى التمييز بين العزلات الشرسه والغير شرسه بواسطه 1- العدوي بالصوبة 2- التفريد الكهربي للبروتين ، 3- استخدام معلم جزيئي وهو الـ SCoT للتمييز بين العزلات ، 4- استخدام ثماني جينات خاصة R. solanacearum منها ثلاث للتعريف والتاكيد وخمسة اخري للتمييز بين عزلة شرسه واخري غير شرسه.
ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها من هذه الدراسه كتالى :-
1- العزلات البكتيرية :
عزل 14 عزله من بكتيريا رالستونيا سولانسيريم من محافظات مختلفه كانت 5 عزلات من محافظات مختلفه منها محافظه القليوبيه و3 عزلات من البحيره وعزلتين من الجيزه والشرقيه وعزلتين من الغربيه ، وتنميه العزلات على بيئه متخصصه ( TZC) لهذا النوع من البكتيريا تم التاكيد على البكتيريا انها R. solanacearum والتفرقه بين المستعمرات الشديده المرضيه والمستعمرات الفاقده لاحداث المرض الذبول البكتيري فى نباتات البطاطس. تم اجراء اختبار القدره المراضيه لـ 14 عزله من R. solanacearum على درنات البطاطس صنف اسبونتا وجد ان 10 عزلات لها شده مرضيه عاليه ( لمرض الذبول البكتيرى فى نباتات البطاطس) و4 عزلات متوسطه فى الشده المرضيه وظهرذلك واضحا فى ظهور المرض الذبول فى نباتات البطاطس.
2- تحديد مستوى التباين باستخدام تحليل البروتين :
استخدمت تقنية (SDS-PAGE) لتحليل المحتوى البروتيني للبروتينات الغشائية والخلوية حيث أوضحت النتائج ان هناك اختلاف بين العزلات ، وأظهرت العزلات حزم بروتينية متابينه. واظهر التحليل الشجرى بناءا على مصفوفه ظهور الحزم البروتينيه من عدمه فيما يسمى مصفوفه الصفر والواحد ان العزلات انفصلت فى مجموعتين رئسيتين : المجموعه الرئيسيه الاولى تحتوي علي العزلات ( 1، 2، 7، 8، 9، 11، 12، 13، 14) ، بينما المجموعه الرئيسيه الثانيه تحتوي علي العزلات ( 3، 4، 5، 6، 10)
3- تحديد مستوى التباين باستخدام تقنية SCoT
تم استخدام 10 بادئات من ال SCoT بهدف التمييز بين العزلات وتحليل التباين الوراثي ، أظهرت هذه البادئات 143 منطقة متضاعفة لـDNA بمتوسط 14.3 لكل بادئ منها 112 منطقة متضاعفة لـDNA متباينة وتمثل نسبة التباين ( 76.4%) بين العزلات، بأحجام تتراوح من 130 إلى 2100 زوج قواعد نيتروجينية. وتم تقدير العلاقه الوراثية بين اربعة عشر عزله يناء على التشابه الوراثى باستخدام معامل Dice. و لقد تراوحت نسبة التشابه الوراثى بين 75٪ و83 ٪ . وقد أظهر تحليل الـ SCoT أن أعلى نسبة للتشابه الوراثى (83 ٪) كانت بين العزلات ( 5 و6 ) ، بينما كانت أقل نسبة تشابه وراثى (75٪) بين العزلات (3 و 13) . وتم إجراء تحليل علاقات القرابة الوراثية بناء على مصفوفات التشابه المأخوذة من كل نوع من الواسمات باستخدام طريقة الـ UPGMA لرسم (dendrograms) توضح درجة القرابة الوراثية بين العزلات البكتيريا ، حيث أوضحت الدراسة أن (dendrogram) قسم العزلات الاريعة عشر الي قسمين ; القسم الأول يضم (1، 11، 12، 13، 14) ، بيما القسم الثاني يضم (2، 3، 4، 5، 6، 7، 8، 9، 10).
4-تحديد مستوى التباين باستخدام بعض الجينات