الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 107 |  |  |
| | | from | 107 | | |
Abstract
الهدف من اجراء البحث:
الهدف من اجراء هذا البحث هو تقييم تأثيرهيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان وجزيئات الزجاج النانو النشط بيولوجيا على التمايز السني والتكاثر العددي لخلايا جذع اللب السني البشري.
خطوات البحث:
أ. تحضير العينات:
تم تحضير المواد البيولوجيه المستخدمه في صورة بودرة بمقايس محددة من شركة نانوجيت بالقاهرة مصر.
تم احضار الخلايا الجذعية المعنيه لهذا البحث بعد خلع عدد 3 ضروس العقل (الرحي الثالثة) المدفون من ثلاث مرضي اصحاء بين 18-20 عاما بقسم جراحة الوجه والفكين بكلية طب اسنان جامعة عين شمس بعد الامضاء علي موافقة مستنيرة تابعة لقوانين لجنة الاخلاقيات بكلية طب الأسنان جامعة عين شمس.
ب. تقسيم العينات:
تم زراعة خلايا جذع اللب السني البشري بعد عزلها من جذع اللب السني البشري وتعريفها كخلايا جذعية ميزنكمية أو خلايا جذعية متعلقة باللحمة المتوسطة.
مع معلق تم تحضيره من جميع المواد البيلوجيه المستخدمة بتركيزات محددة غير سامة او قاتلة للخلايا كل علي حده وتم تقسيم هذه الخلايا الى ثلاث مجموعات رئيسية متساوية وهي:
مجموعة )1) مادة الهيدروكسي ابيتيت تركيز (10ميكروجم/مل)
مجموعة(2) مادة الهيدروكسي ابيتيت المغلف بالشيتوزان(10ميكروجم/مل)
مجموعة(3) ماده الزجاج النشط بيولوجيا (500 ميكروجم/مل)
مجموعة (4) الخلايا الجذعية مزروعة في وسط محفز للتحور السني أو العظمي
مجموعة (5) الخلايا الجذعية مزروعة في وسط الاستنبات العادي بدون محفز
ج. طرق تقيم العينات:
أ) تقييم تمايز الخلايا السنية
1) بواسطة تحليل انزيم الفوسفاتاز القلوي:عن طريق تتبع و صبغة انزيم الفوسفاتاز القلوي للخلايا السنية المنشأة
2) التألق أو الفلورة المناعية تحت المجهر الفلوري ل بروتين مصفوفة العاج السنية دي ام بي:
عن طريق مراقبة تألق فلوري للبروتين بعد التلوين وغسيل العينات يليها تجفيف لطيف لها وأخيراً تصويرها.
ب) تقييم تكاثر وانتشار الخلايا:
1) باستخدام صبغة التريبان الأزرق:
تم وضع 10 ميكروليتر من الخلايا المزروعة بكل مجموعة اختبار في عداد خلايا الدم (الهيموسيتوميتر) وبعدها تم وضعها تحت المجهر الضوئي ومن ثم تم عد الخلايا ذات اللون الأزرق والتي تدل علي عدد الخلايا الميتة والخلايا الغير متصبغة دليل لعدد الخلايا الحية بكل مجموعة اختبار
2) باستخدام تحليل مقايسة ميثيل ثيازول تترازوليوم:
تم وضع الخلايا المتمايزة في اطباق زراعة عدد 96 بئر واحتضنت في 37 درجة مئوية في ثاني أكسيد الكربون لمدة 72 ساعة في وسائط محددة وفقا للتجربة ثم أزيلت 100 ميكروليتر من الوسائط وحلت محلها وسائط جديدةزعشرون ميكروليتر من محلول الميثيل ثيازول تترازوليوم أضيفت بتركيز 1 ميلجرام/ملليتر لكل بئر وتم احتضان اطباق الزراعة في نفس الظروف في 37 درجة مئوية في 5% ثاني أكسيد الكربون لمدة أربعة ساعات. تم تحديد قابلية الخلية للاستمرار عن طريق قياس الكثافة البصرية عند 570 نانومتر على مقياس المدارات.
التحليل الاحصائي:
تم تجميع وتحليل البيانات بطريقة احصائية مجدولة.
النتائج:
أ) تقييم تمايز الخلايل السنية:
1) تحليل انزيم الفوسفاتاز القلوي:عن طريق تتبع وصبغة انزيم الفوسفاتاز القلوي للخلايا السنية المنشأة:
تبين من النتايج ان النانو هيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان أعطت أعلي قيمة بين مجموعات الاختبار يليها في النتيجة جزيئات الزجاج النانو النشط بيولوجيا
2) التألق أو الفلورة المناعية تحت المجهر الفلوري ل بروتين مصفوفة العاج السنية دي ام بي:
تبين من النتائج أن النانو هيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان أعطت أعلي قيمة بين مجموعات الاختبار
ب) تقييم تكاثر وانتشار الخلايا:
1) صبغة التريبان الأزرق:
تبين من النتائج أن عدد الخلايا الكلي الأكثر متواجد في مجموعة النانو هيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان وعدد الخلايا الحية الأكثر بها ايضا وأقل عدد من الخلايا الميتة موجود بهذه المجموعة.
2) تحليل مقايسة ميثيل ثيازول تترازوليوم:
تبين من النتائج أنه يوجد فرق جوهري واضح بمجموعتي النانو هيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان وجزيئات الزجاج النانو النشط بيولوجيا لوجود الخلايا الحية التي لديها قابلية للاستمرار بين باقي مجموعات الاختبار ولكن لا يوجد فرق بينهما.
الاستنتاج والتوصيات:
تبين من نتائج التجربة ان كل مواد الاختبار تعتبر بيئة مناشبة لتمايز وتكاثر خلايا جذع اللب السني البشري وأن النانو هيدروكسي أباتيت المغلفة بالشيتوزان أعطت افضل النتائج ونستطيع ان نسند هذه النتيجة الي وجود بوليمر الشيتوزان مع مادة النانو هيدروكسي أباتيت الذي اضفي خاصية مضاد بالإضافة الي مساهمته كرابط بين تركيب المصفوفة ساعد في مهاجرة الخلايا وتمايزها والتصاقها وتكاثرها ونستطيع ان نعتبر ان هذه المادة تساهم بشكل مستقبلي في درسات تجديد النسيج السني.
التوصيات:
1) المزيد من الدراسات العملية الاكلينيكية لدراسة اضافة بوليمر الشيتوزان الي مواد غطاء العصب السني البشري المباشر او الغير مباشر.
2) المزيد من الدراسات العلمية لذراسة تأثير جزيئات بوليمر الشيتوزان علي الخواص الفيزيائية والميكانيكية لمواد غطاء العصب او مواد تجديد وانعاش العصب السني.