الفهرس 
Enteric virusesOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 227 |  |  |
| | | from | 227 | | |
Abstract
تعد فيروسات الروتا المسبب الفيروسي الاول للنزلات المعوية في الاطفال في الفئة العمرية تحت سن خمس سنوات حيث نسب الاصابة و الوفيات في البلاد النامية هي الاعلي عالميا, وبالرغم من توفر نوعين من اللقاحات التجارية في الاسواق ضد فيروسات الروتا منذ عدة أعوام , إلا ان العديد من الدراسات أشارت الي ان فاعلية و كفائة تلك اللقاحات في الدول النامية أقل من مثيلتها في الدول المتقدمة , كذالك بعض المخاوف من الاضرار الجانبية لتلك اللقاحات مثل خطر الانغماد المعوي و تحول الفيروس المستخدم في اللقاح الي نوع ممرض أو أنتاج سلالة جديدة اكثر شراسة ناتجة من تداخل الحمض النووي للسلالات المستخدمة في اللقاح مع السلالات الموجودة بالبيئة بالاضافة الي التكلفة العالية نسبيا للقاح مما يجعله غير متاح للفئات الأكثر إحتياجآ و لذالك فقد وجب البحث عن لقاحات بديلة أقل تكلفة و اكثر فاعلية و أمان.
نوعان من اللقحات البديلة المرشحة تم أختبارهم لتحديد مدي كفائتهم و فاعليتهم في مقاومة فيروس الروتا الأدمي وهما: البروتين التركيبي VP6 لفيروس الروتا الأدمى و الفيروس الموقوف النشاط كلقاحات مرشحة للفيروس.
من أجل تحديد ما اذا كان البروتين التركيبي VP6 لفيروس الروتا لأدمي يصلح لكي يكون لقاح بديل عن الانواع التجارية تم عمل دراسة للتتابع الجيني لجين VP6لتقييم الطفرات المؤثرة و غير المؤثرة في التتابع الجيني و تقييم مدي تشابه هذا التتابع في االسلالات المختلفة من فيروسات الروتا المعزولة من عينات مياه تم تجميعها من محطة الجيزة لمعالجة مياه الشرب بالجيزة و عينات صرف صحي تم تجميعها من محطتي زنين بالجيزة و الجبل الأصفر بشمال القاهرة لمعالجة الصرف الصحي علي مدار عامين متتاليين و كذالك عينات أسهال من اطفال مصابين بنزلات معوية بسبب الفيروس من مستشفي ابو الريش للأطفال بالقاهرة الكبري في نفس الفترة الزمنية بأستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل العكسي ثم عمل sequencing للعينات التي اعطت نتائج إيجابية و أحتوت علي فيروس الروتا الأدمي لتحديد الطفرات في التتابع الجيني لجين VP6.
أظهرت نتيجة الدراسة التشابه الكبير في التتابع الجيني لجين VP6بين السلالات المختلفة من فيروسات الروتا المعزولة من عينات المياه و العينات الاكلينيكية من المرضي , كما أظهرت ايضا ان أغلب الطفرات التي حدثت في جين VP6 لم تكن مؤثرة علي تركيب البروتين من حيث تتابع الاحماض الامينية مما يرجح نظرية أستخدام البروتينا التركيبي VP6 لفيروس الروتا الأدمي كلقاح ضد فيروسات الروتا.
من أجل الحصول علي البروتين التركيبي VP6 فقد تم ترجمة جين VP6في بكتيريا E.coli بأستخدام plasmid مصمم خصيصا لكي يحتوي علي التتابع الكامل لجين VP6 و كذالك جين مقاومة المضاد الحيوي الأمبسيلين و تم تعديل جين VP6 لكي ينتهي تتابع البروتين بالحمض الاميني Histidine من أجل تنقية البروتين و فصله عن باقي بروتينات البكتريا المستخدمة لإنتاجه.
وقد تم الحصول علي البروتين التركيبي VP6 النقي بتركيز يساوي 0.162±0.005مللي جرام لكل واحد مللي ليتر, بعد تنقيته بأستخدام طريقة (Ni-IMAC) وقياس تركيزه بأستخدام طريقة , Bradford’s method ثم تم أختبار الإستحثاث المناعي لذالك البروتين عن طريق حقنه في حيوانات التجارب (الأرانب) و تحديد الاجسام المضادة ضد فيروس الروتا الأدمي في عينات دم من تلك الحيوانات بأستخدام تقنيات مناعية مثلImmunobloting وكذالك تقنية ELISA و قد وجد أن مستوي الأجسام المضادة التي تكونت ضد البروتين التركيبي VP6 في عينات الدم من حيوانات التجارب يساوي 1:24.000
أما المرشح الثاني كلقاح محتمل ضد فيروس الروتا فهو الفيروس الموقوف النشاط , حيث تم عمل تثبيط نشاط فيروس الروتا بأستخدام المعالجة الحرارية عن طريق تعريض الفيروس لدرجة حرارة 60 درجة مؤية في حمام مائي لمدة ساعتين متتاليتين و كذالك تثبيط نشاطه كميائيا بأستخدام مادة β-probalactone حيث تم إضافتها علي الفيروس بتركيز 1:3000 لمدة ساعتين عند درجة حرارة 37 درجة مؤية, بعد التأكد من فقدان الفيروس القدرة علي إحداث المرض تم أختبار الإستحثاث المناعي للفيروس الموقوف النشاط عن طريق حقنه في حيوانات التجارب (الفئران) في ثلاث جرعات متتالية لمدة 45 يوم و تحديد الاجسام المضادة ضد فيروس الروتا في عينات الدم من حيوانات التجارب بأستخدام تقنية ELISA و قد وجد أن مستوي الأجسام المضادة التي تكونت في عينات الدم من حيوانات التجارب ضد الفيروس المثبط نشاطه كميائيا بأستخدام مادة
β-probalacton يساوي 1:30.000, بينما وجد أن مستوي الأجسام المضادة التي تكونت ضد الفيروس المثبط نشاطه حراريا يساوي 1:6000.