الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 168 |  |  |
| | | from | 168 | | |
Abstract
تعتبر الأكتينوميسيتات من المصادر الهامه لإنتاج مركبات أيضية حيوية عديده ومنها الأنزيمات التي تنتج بنسبة كبيرة وبخاصة من جنس الإستربتوميسيس. ھﺬه اﻟﺮﺳﺎﻟﺔ تهدف الى عزل ﺑﻌﺾ الاكتينوميسيتات اﻟﺘﻰ ﺗﻌﯿﺶ ﻓﻰ أراﺿﻰ مصر(ﻣﺤﺎﻓﻈﺔ دﻣﯿﺎط)، والدولة الليبية-(مسلاته)، بالإضافة إلى 32 سلالة قدمت من قسم النبات والميكروبيولوجي، كلية العلوم، جامعة دمياط، واﻟﻘﺎدرة ﻋﻠﻰ إنتاج إنزيم التيروسينيز. وﻗﺪ ﺗﻢ ﻋﺰل 36 عزلة مختلفة ﻣﻦ ھﺬه اﻟﻜﺎﺋﻨﺎت من مواقع مختلفة من التربة المصرية والليبية. وقد تمت عملية مسح للكائنات علي ﺑﯿﺌﺔ التيروسين اﻟﻐﺬاﺋﯿﺔ الصلبة وكان إنتاج المستعمرات للون البني التي تغيرت تدريجيا لونه إلى الأسود (تشكيل الميلانين) يدل على أن العزلات كانت إيجابية لإنتاج التيروسينيز. وأسفرت نتائج عملية المسح الأولية للعينات على الوسط الغدائي الصلب عن وﺟﻮد 8 ﻋﺰلات فقط ﻣﻦ ھﺬه اﻟﻜﺎﺋﻨﺎت واﻟﺘﻰ ﺗﻌﻄﻰ بقع بنيه داكنة أو سوداء ﻋﻨﺪ ﻧﻤوھﺎ ﻋﻠﻰ ﻧﻔﺲ اﻟﺒﯿﺌﺔ اﻟﺴﺎﺑﻘﺔ.
تم إختيار هذه العزلات التي لها نشاط إنزيمي لتكسير التيروسين وتم تنميتها ﻓﻰ ﺑﯿﺌﺔ التيروسين ﺳﺎﺋﻠﺔ (المسح الثانوي) لتقدير عدد ما تنتجه هذه العزلات من إنزيم التيروسينيز. ودلت النتائج علي أن العزلات6F, F13 وD14و26 هي الأكثر نشاطا ﻹﻧﺘﺎج الإنزيم ولها نشاط إنزيمي يقدر ب (1.34 وحدة/مل) (1.2 وحدة/مل)، )4.8 وﺣﺪة/ﻣﻞ)، (8.4 وحدة/مل) ﻋﻠﻰ اﻟﺘﻮاﻟﻰ. وﻗﺪ ﺗﻢ أيضا ﺗﻌﺮﯾف عدد ثماني عزلات من الكائنات المعزولة واﻷﻛﺜﺮ ﻧﺸﺎﻃﺎ ﻹﻧﺘﺎج التيروسينيز ﻣﻦ ﺧﻼل دراﺳﺔ اﻟﺼﻔﺎت التزريعية واﻟﻤﻮرﻓﻮﻟﻮﺟﯿﺔ باستخدام الميكروسكوب الضوئي والميكروسكوب الالكتروني وأيضا بدراسة بعض الصفات اﻟﻔﺴﯿﻮﻟﻮﺟﯿﺔ والكيموحيوية تبعا لأحدث الطرق العالمية المتبعة في هذا المجال وﻗﺪ تم تسميتها كالتالي: إستربتوميسيس Streptomyces species Streptomyces malachitorectus, (إستربتوميسيس مالاكاتوريكتس) وStreptomyces iakyrus (إستربتوميسيس أيكيرس) و Streptomyces echinatus (إستربتوميسيس إيكاناتس) واﻣﺘﺪت اﻟﺪراﺳﺔ ﻟﺘﻌﯿﯿﻦ اﻟﻈﺮوف اﻟﺒﯿﺌﯿﺔ اﻟﻤﺜﻠﻰ للكائنات الأعلى نشاطا ﻹﻧﺘﺎج إﻧﺰﯾﻢ التيروسينيز وذلك لكل من إستربتوميسيس أيكيرس وإستربتوميسيس إيكاناتس، ﺣﯿﺚ أﻇﮭﺮت اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ أن اﻟﻈﺮوف اﻟﻤﺜﻠﻰ ﻹﻧﺘﺎج إﻧﺰﯾﻢ التيروسينيز ﻟﻠﻜﺎﺋﻨﯿﻦ ﻛﺎﻷﺗﻰ: ﻓﺘﺮة اﻟﺘﺤﻀﯿﻦ ﻛﺎﻧﺖ 4 و5 أيام واﻷرﻗﺎم اﻟﮭﯿﺪروﺟﯿﻨﯿﺔ ﻛﺎﻧﺖ 7 ،8 لكل من إستربتوميسيس أيكيرس وإستربتوميسيس إيكاناتس ﻋﻠﻰ اﻟﺘﻮاﻟﻰ، الجليسرول ﻛﻤﺎدة ﻛﯿﻤﯿﺎﺋﯿﺔ ﻧﻘﯿﺔ أﻓﻀﻞ ﻣﺼﺪر ﻛﺮﺑﻮني ﻹﻧﺘﺎج الأنزيم لكل من إستربتوميسيس أيكيرس وإستربتوميسيس إيكاناتس ﺑﺘﺮﻛﯿﺰ1.5% و ﻛﺎﻧﺖ درﺟﺔ اﻟﺤﺮارة اﻟﻤﺜﻠﻰ 30 oم ﻹﻧﺘﺎج اﻹﻧﺰﯾﻢ. والتيروسين ﻛﺎن أﺣﺴﻦ ﻣﺼدر ﻧﯿﺘﺮوﺟﯿني للكائنين ﻹﻧﺘﺎج إﻧﺰﯾﻢ التيروسينيز.
اﺷﺘﻤﻠﺖ اﻟﺪراﺳﺔ أﯾﻀﺎ ﻋﻠﻰ ﺗﻨﻘﯿﺔ وﻓﺼﻞ إﻧﺰﯾﻢ التيروسينيز ﻣﻦ إستربتوميسيس أيكيرس وذﻟﻚ ﺑﻮاﺳﻄﺔ اﻟﺘﺮﺳﯿﺐ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﻛﺒﺮﯾﺘﺎت اﻷﻣﻮﻧﯿﻮم70% ، والفصل الغشائي ((dialysis ﺛﻢ اﺳﺘﺨﺪام ﺗﻘﻨﯿﺔ Anion exchange chromatography ، وﻛﺬﻟﻚ Sephadex Gel filteration column . ﺗﻢ ﻓﺼﻞ ﺑﺮوﺗﯿﻦ اﻹﻧﺰﯾﻢ ﺑﻨﺸﺎط ﻧﻮﻋﻰ ﻗﺪره 20.204 وﺣﺪة إﻧﺰﯾﻤﯿﺔ ﻟﻜﻞ ﻣﻠﯿﺠﺮام ﺑﺮوﺗﯿﻦ. وﻋﺎﻣﻞ ﺗﻨﻘﯿﺔ 7.132. ﻛﺬﻟﻚ ﺗﻢ دراﺳﺔ ﺧﻮاص وﺻﻔﺎت اﻹﻧﺰﯾﻢ اﻟﻨﻘﻰ من إستربتوميسيس أيكيرس، ﺣﯿﺚ ﺑﯿﻨﺖ اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ ﻋﻠﻰ أن درﺟﺔ اﻟﺤﺮارة 35oم واﻟﺮﻗﻢ اﻟﮭﯿﺪروﺟﯿﻨﻰ 7 ھﻤﺎ اﻟﻈﺮوف اﻟﻤﺜﻠﻰ ﻟﺰﯾﺎدة ﻧﺸﺎط اﻹﻧﺰﯾﻢ اﻟﻨﻘﻰ. ﺗﻢ ﺗﻘﺪﯾﺮ اﻟﻮزن اﻟﺠﺰﯾﺌﻰ ﻟﻺﻧﺰﯾﻢ ھﻮ 22 ﻛﯿﻠﻮ داﻟﺘﻮن ﺗﻘﺮﯾﺒﺎ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪام ﺗﻘﻨﯿﺔ SDS- PAGE Electrophoresis.