الفهرس 
Chapter I: Introduction and Aim of the workOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 134 |  |  |
| | | from | 134 | | |
Abstract
يعتبر الالتهاب الكبدى الناتج عن الفيروس ” سى” مرضًاله تأثيره السيئعلى المستوى العالمى. و طبقًا لإحصائية منظمة الصحة العالمية فهناك حوالى 170-200 مليون فرد على المستوى العالمى مصابون إصابة مزمنة بالفيروس ”سى”، وتمثل هذه النسبة حوالى 2-2.5% من التعداد العالمى.ويعتبر القطرالمصرى من أعلى البلاد إصابةبالفيروس الكبدى ”سى” حيث تبلغ نسبة الإصابة 14.7% .
إن علاج مرضى الالتهاب الكبدى المزمن ”سي” يكون باستخدام إنترفيرون ألفا طويل المفعول مع الريبافارين. إلا أن المشكلة الأساسية التى تواجه كثير من المرضى هى مقاومتهم لهذا النوع من العلاج. ويرجع سبب هذه المقاومة وعدم الاستجابة للعلاج إلى تعدد الصور الجينية عند هؤلاء المرضى و الذي يصحبه درجات متفاوتة من الاستجابة للعلاج. وتتمثل النتائج الإجابية لهذا العلاج في الاستجابة الفيروسية المستدامة والتي تتضح في النتائج السلبية لإختبار الــ بى- سى- آر بعد توقف العلاج لفترة 3 شهور. إن معدل الاستجابة الفيروسية المستدامة فى الأفراد المصابين بالفيروس الكبدى ”سي” ذوى التركيب الجينى 1 أو4 يكون ما بين 40-50%، وتتطلب فترة العلاج فى هذه الحالة 12 شهرًا.
ولقلة معدل الاستجابة للعلاج بالإنترفيرون والريبافارين تم التخطيط لدراسة تعدد الصور الجينية التى تؤثر فى الاستجابة لهذا النوع من العلاج و ذلك فى المرضى المصرين ذوى التركيب الجيني-4 و المصابين بالفيروس ”سى”.
وأشارت دراسات كثيرة مرتبطة بالجينوم إلى وجود تعدد وراثى لنويتيدة واحدة (إس. إن. بي) في جين إنترليوكين IL28B)) وهذه النويتيدة مرتبطة بالاستجابة الفيروسية المستدامة أثناء علاج الحالات الكبدية المزمنة بالإنترفيرون والريبافارين. ويضم هذا التعدد الوراثى المنطقة التى بها 3 جينات خاصة بالسيتوكينات التابعة للإنترفيرون. كما أشارت الدراسات إلى أن جين إنترليوكين IL28B)) له نويتيدتين على الكروموسوم رقم 19 هما: rs12979860، rs8099917وهاتين النويتيدتين لهما دور فى نجاح أو فشل العلاج بالإنترفيرون و الريبافارين.
لقد أشارت بحوث حديثة إلى أن استبدال الأحماض الأمينية فى الموضع 70 فى المنطقة المركزية للفيروس ”سي” فى المرضى المصابين بالفيروس ذوى النمط الوراثى-4وكذلك الأحمال الفيروسية المرتفعة تعد السبب فى الاستجابة الفيروسية المنخفضة أثناء العلاج بالإنترفيرون والريبافارين. إضافة إلى ذلك فإن بحثًا حديثًا قد أشار إلى أن استبدال الأحماض الأمينية فى لب الفيروس يمكن أن يكون مفيدُا قبل البدء فى العلاج وذلك للتنبؤ بديناميكية عالية فى وقت مبكر.
كان الهدف من الدراسة الحالية هو دراسة تأثير العوامل التى تؤدى إلى استجابة فيروسية مستدامة و ذلك قبل البدء فى البرنامج العلاجى خاصة بالإنترفيرون و الريبافارين. ومن أهم هذه العوامل العامل الوراثى المتعلق بالاستجابة لهذا النوع من العلاج متمثلًا فى التراكيب الوراثية الخاصة بالنويتيدة rs8099917 من جين إنترليوكين .28B لقد تم هذا الاختيار بناًء على نتائج لأبحاث سابقة أجريت على مرضى مصابين بالفيروس ”سى” إلا أن أنماطهم الوراثية كانت غير النمط الوراثى رقم 4. تم اختيار عدد50 مريضًا من المصريين المصابين بفيروس الالتهابالكبدى ”سى” وذلك ممن كانت نسبة الفيروسات عندهم مرتفعة. كان العلاج بالإنترفيرون طويل المفعول مع الريبافارين، وكان التركيب الوراثى لهؤلاء المرضى من الطرز الوراثى الرابع. هذا بالإضافة إلى دراسة الطفرات التى قد تنجم عن استبدال للحمض الأميني فى الموضع 70 فى المنطقة المركزية للفيروس ”سى” ، ومدى تأثير هذه الطفرات فى الاستجابة للعلاج.
كانت أعمار المرضى من 15 عامًا فأكثر، تم التحقق من إصابتهم بالفيروس ”سى” وذلك بإجراء qRT- PCRو تحديد نسبةالـ“RNA” ”الرنا” الخاصة بالفيروس، و بدأ البرنامج العلاجى بإستخدام الإنترفيرون طويل المفعول مع الريبافارين ، وروعى بدقة الجرعة العلاجية ودرجة التليف الكبدى عند المرضى. تم استبعاد المرضى أقل من 15 عامًا، والمصابون بإصابات فيروسية كبدية أخرى، و أيضًا ممن عندهم أورامًا كبدية.
تم سحب 5 ملليلتر دم من كل مريض، قسمت هذه الكمية إلى جزئين فى أنبوبتين: إحداهما لاستخلاص المصل والثانية بها مادة ال EDTA كمانع للتجلط وذلك لاستخلاص البلازما. وتم إجراء التحليلات الآتية لكل مريض:
• تقييم الأجسام المضادة وكذلك نسبة الـ ”الرنا” الخاصة بالفيروس ”سى” وذلك باستخدام تقنية RT- PCR.
• صورة دم كاملة وذلك باستخدام عداد كولتر.
• التحاليل الكيميحيوية ومنها إنزيم AST، ALTوالبيليروبين (الكلي / المباشر) فى مصلالدموكذلك الكرياتينين.
• تقييم الصور الجينية المختلفة للنويتيدة رقم rs8099917 من جين إنترليوكين 28B وذلك باستخدام تقنية الـ qRT- PCR ومجس ”تاكمن”.
• التعرف على استبدال للحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لب الفيروس الكبدى ”سى” باستخدام تقنية الـ RT- PCR.
لقد أوضحت الدراسة الحالية أن الطرز الوراثى متماثل الآليلات TTلجين الإنترليوكين 28B بين المرضى محل الدراسة هو الأكثر تكرارا حيث بلغت نسبته 64%، ويليه التركيب الوراثى الخليط GT بنسبة 32% ثم الطرز المتماثل GG بنسبة 4%. و فيما يتعلق بالأنماط الجينية المفضلة والتى أظهرت استجابة جيدة للعلاج كان التركيب الوراثى TT على رأس القائمة حيث كانت نسبة المرضى الذين أظهروا استجابة فيروسية مستدامة 87.5% مقارنة بالطرزين ,GG.TG
و بفحص انتشار استبدال الحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لبالفيروس الكبدى ”سى”أوضحت الدراسة أن 24% من المرضى كانت بهم طفرات فى هذا الموضع، 76% كانوا عاديين (لا يوجد بهم طفرات).وبدراسة العلاقة بين وجود وعدم وجود الطفرات والاستجابة للعلاجبالإنترفيرون مع الريبافارين فى المرضى ذى التركيب الوراثى الرابع وجد أن الأفراد العاديين (بدون طفرات) كانت هى الأفضل حيث وصلت نسبة المرضى الذين أظهروا استجابة فيروسية مستدامة إلى 74.4%، أما فى الأفراد حاملى الطفرات فكانت النسبة 41.4%.
وفيما يتعلق بالمرحلة السنية ونوع الجنس، أشارت النتائج إلي أنه ليس السن ولا نوع الجنس يمكن الإعتماد على أي منهما في التنبؤ أو التوقع في تحقيق استجابة فيروسية لعلاج الأنماط الوراثية المختلفة لجين إنترليوكين 28B. وعلى النقيض فكان للسن ونوع الجنس تأثير ملحوظ في الاستجابة للعلاج في كل من المرضي الحاملين وغير الحاملين لطفرات مرتبطة باستبدال للحمض الأميني في الموضع 70.
وفي حالة القياسات الدموية مثل العدد الكلي للكرات الدموية البيضاء وعدد الصفائح الدموية ومستويات الهيموجلوبين وذلك في أفراد الأنماط الوراثية الثلاثة لجين إنترليوكين (TT, GT, GG ) 28B لم تكن هناك اختلافات ملحوظة ماعدا مستويات الهيموجلوبين التي أظهرت اختلافًا معنويًا كبيرًا. وبالنسبة للإختبارات الكيميحيوية كان هناك اختلاف ملحوظ بدرجة كبيرة في البليروبين المباشر واختلاف ملحوظ بدرجة أقل في البليروبين الكلي، ولم تكن هناك أختلافات في البليروبين غير مباشر، وفي إنزيمي ALT, AST، والكرياتينينوذلك في الأنماط الثلاثة لجين إنترليوكين 28B.
وبالنسبة للقياسات الدموية والكيميحيوية في حالة وجود أو عدم وجود طفرات ( أي استبدال أو عدم استبدال) للحمض الأميني في الموضع 70 في لب الفيروس الكبدي ”سي” أشارت النتائج إلى وجود اختلاف ملحوظ بين الأنواع العادية والأنواع المطفرة وذلك في نسبالهيموجلوبين فقط، ولم تكن هناك اختلافات ملحوظة في العدد الكلي للكرات البيضاء والصفائح الدموية في أفراد المجموعتين . كما أشارت الاختبارات الكيميحيوية إلى عدم وجود اختلافات ملحوظة بين الأفراد ذوى التركيب الوراثي العادي والأفراد المطفرة.
الاستنتاجات
أوضحت هذه الدراسة أن تعدد الصور الجينية للنويتيدةrs8099917من جين إنترلوكين 28B واستبدال للحمض الأميني في الموضع 70 في لب الفيروس الكبدي ” سي” كانت متنبآت للعلاج بالإنترفيرون طويل المفعول مع الريبافارين في المرضي المصريين ذوي النمط الوراثي الرابع. علاوة على ذلك، كان التركيب الوراثي المتماثلTTلجين إنترليوكين 28B من التراكيب الوراثية التي حققت نجاحًا ملحوظًا بالعلاج بالإنترفيرون و الريبافارين، أما الآليل G فلا. وكذلك عدم وجود طفرات، أي عدم استبدال للحمض الأميني في الموضع 70 في لب الفيروس ”سي” يعتبر متنبأ بنجاح العلاج بالإنترفيرون و الريبافارين أما فى حالة وجود طفرات، أي حدوث استبدال للحمض الأميني في الموضع 70 لا يعتبر متنبأ بنجاح العلاج.
التوصية
نوصي بدراسة الدلائل الوراثية المشار إليها في الرسالة وذلك في المرضي المصريين المصابين بالإلتهاب الكبدي الفيروسي ”سي” وذوي النمط الجيني الرابع قبل بدء العلاج بالإنترفيرون طويل المفعول مع الريبافارين وذلك للتعرف علي أفضل درجة للاستجابة الفيروسية المستدامة يمكن تحقيقها، ولتوفير النفقات، ولتحسين النتائج والحصيلة العلاجية.
المستخلص
اسم الطالبة: ميادة حسين أحمد حسين
دكتوراه الفلسفة في العلوم- علم الحيوان (وراثة)
قسم علم الحيوان- كلية العلوم – جامعة عين شمس
عنوان الرسالة: استبدال حمض أمينى فى لب الفيروس الكبدى ”سى” والتنوع الوراثى لجين إنترليوكين 28 باء وعلاقتهما بفشل العلاج بالإنترفيرون فى المرضى المصريين المصابين إصابة مزمنة بالفيروس الكبدى ”سى”.
لقد أصبح مرضالالتهابالكبدىالفيروسى ”سى”المزمن منالأمراضالقابلة للشفاءعلى المستوىالعالمى.ويرجع ذلك إلى الفاعليه الفائقة للمضاداتالفيروسيه، ورغمذلكظهرتحالاتكثيرة مقاومة للعلاج بالإنترفيرونمع الريبافارين،والسبب في ذلك هوالتعددالوراثى فى جين إنترليوكين 28Bأواستبدال الحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لب الفيروس الكبدى ”سى”. وللتحقق من ذلك تم تقييم الصور الجينية المختلفة للنويتيدة رقم rs8099917من جين إنترليوكين 28B وأيضًا التعرف على ما إذا كان هناك استبدال للحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لب الفيروس الكبدى ”سى” وذلك لدورهما فى التأثير على الاستجابةللعلاجبالإنترفيرونوريبافارين.
تماختيار 50 مريضًامن المصابينبالفيروسالكبدى”سى”وبدأ البرنامج العلاجى باستخدام الإنترفيرونوالريبافارين و تتطلب فترة العلاج فى هذه الحالة 48 اسبوعًا. وتم استخدام تقنية الـRT- PCR ومجس ”تاكمن” فى تحديد الصور الجينية المختلفة للنويتيدة رقم rs8099917 من جين إنترليوكين28Bوايضًا تم التعرف على استبدال الحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لب الفيروس الكبدى ”سى” باستخدام تقنية الـRT- PCR. كما تم إجراء بعض القياسات الدمويه مثل: صورة كاملة للدم و ايضًا قياسات الكيميحيوية ومنها إنزيم AST، ALT والبيليروبين (الكلي / المباشر) فى مصلالدموكذلك الكرياتينين.
وقد أوضحت النتائج أن الطرز الوراثى المتماثل TT لجين الإنترليوكين 28B هو الأكثر تكرارًا ويليه التركيب الوراثى GT ثم الطرز المتماثل GG. و بالنسبة للأنماط الجينيه المفضلة و التى أظهرت استجابة جيدة للعلاج كان التركيب الوراثى TT فى المقدمة. وفيما يتعلق بالحمض الأمينى فى الموضع 70 فى لبالفيروس الكبدى ”سى” أشارت النتائج أن الأفراد العاديين ”بدون طفرات” كانت هى الأفضل فى الاستجابة للعلاج. وفي حالة القياسات الدموية سجلت مستويات الهيموجلوبين فقط اختلافًا معنويًا كبيرًا فى الأنماط الوراثية الثلاثة (TT, GT, GG). و بالنسبة للأختبارات الكيميحيوية كان هناك اختلاف بدرجة متفاوتة فى البيليروبين(الكلي / المباشر) ولم يكن هناك اختلافات فى البيليروبين غير المباشر و فى انزيمي AST, ALTوكذلك الكرياتينين.
وفي حالة وجود او عدم وجود طفرات فى الحمض الأمينى بالموضع 70 أشارة النتائج إلى وجود اختلاف ملحوظ بين الأنواع العادية و الأنواع المطفرة وذلك فى نسبة الهيموجلوبين فقط.
أستنتجت هذه الدراسة أن تعدد الصور الجينية للنويتيدة rs8099917 من جين إنترلوكين 28B واستبدال للحمض الأميني في الموضع 70 في لب الفيروس الكبدي ” سي” كانت متنبآت العلاج بالإنترفيرون طويل المفعول مع الريبافارين.
الكلمات الدالة: فيروسالالتهابالكبدى”سى”، جين إنترليوكين 28B،العلاج بالإنترفيرونوالريبافارين،استبدال الحمض الأمينىفي لب الفيروس الكبدي ” سي”،.