الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
Abstract
أجريت هذه الدراسة في قسم الوراثة والهندسة الوراثية بالتعاون مع قسم أمراض النبات , كلية الزراعة , جامعة بنها (2015 – 2016 ) في حين تمت زراعة المشروم الميلكى Calocybe indica فى صوبة زجاجية مجهزة لانتاج المشروم تابعة لقسم الوراثه والهندسة الوراثية . وتم تعريض السلالات للاشعاع بهيئة الطاقة الذرية . كما أجريت التقديرات الكيميائية بمركز البحوث الزراعية .فى هذه الدراسة تم جمع خمسة عزلات مختلفه من عيش الغراب هي AB , PO , CI-1 ,CI-2 & CI-3 تنتمى الى ثلاثة أصناف هي عيش الغراب الاجاريكسAgaricus bisporus والبللوروتس pleurotus ostreatus والميلكى Calocybe indica من المشروم من مصادر مختلفه .
وبالتالى فان الاهداف الرئيسية لهذه الدراسة هى :
1) جمع , حفظ واجراء دراسات مظهرية على عزلات مختلفة من المشروم الميلكى Calocybe indica .
2) دراسة استجابة ثلاث سلالات من المشروم الميلكى Calocybe indica لجرعات مختلفة من أشعة جاما ( 10 , 250 , 500 , 750 , 1000 جراى) من ناحية نمو الميسليوم , مؤشرات النمو والمحصول , التركيب الكيميائى .
3) استخدام التفريد الكهربى لفصل بروتينات المشروم الميلكى وطفراته وتقدير الوزن الجزيئى لها .
4) استخدام تحليل ISSR-PCR لدراسة التباين الوراثى بين سلالات المشروم الميلكى وبعضها وبينها وبين طفراتها .
5) دراسة التنوع الوراثى بين عزلات المشروم المختلفة باستخدام الواسمات الجزيئية ( الميكروستاليت Microsatellites ) .
ويمكن تلخيص النتائج المتحصل عليها كالتالى :
i. تأثير أشعة جاما على نمو هيفات المشروم الميلكى Calocybe indica .
هذه النتائج أكدت الاستجابة المختلفة للثلاث سلالات من Calocybe indica لخمسة جرعات مختلفة من الاشعاع فعند قياس 14 يوم بعد التشعيع لوحظ ما يلى :
1) السلالة CI-2 أخذت أقل وقت لاستكمال نمو الميسليوم تليها السلالة CI-3
2) النمو الميسليومى للعزلات المعاملة بجرعة الاشعاع 10 جراى كانت أسرع من تلك غير المعاملة بالاشعاع بينما الجرعات العالية ( 250, 500, 750, 1000 جراى ) ثبطت نمو الميسليوم بشكل ملحوظ .
3) الطفرة CI-2(10 gy) أخذت اقصر وقت لاستكمال نمو الميسليوم (9 يوم) عند مقارنتها بكل الأباء والطفرات .
4) اللون والرائحة لم يتغيرا بفعل الاشعاع .
ii. محصول Calocybe indica وإنتاج الطفرات .
أظهرت النتائج اختلافات هامة بين سلالات المشروم الميلكى موضع الدراسة Calocybe indica وبينها وبين طفراتها الناتجة عن خمسة جرعات من الاشعاع بالنسبه للمحصول والاختلافات المورفولوجية كما يلى :
1) السلالة CI-1 أعطت أعلى محصول , كفاءه حيوية B.E.% , أقل فترة زراعة بالإضافة الى اكبر عدد من الثمار مقارنة بباقى السلالات .
2) جرعة الاشعاع 750 جراى أعطت أعلى محصول , كفاءة حيوية B.E.% بالإضافة الى أعلى عدد من الثمار مقارنة بباقى جرعات الاشعاع .
3) الطفرة CI-1(250 gy) أعطت أعلى محصول (746.67 g ) كفاءة حيوية B.E.% (149.33 %) بالإضافة الى اكبر عدد من الثمار (12.67 ) تليها الطفرة CI-1(750 gy) حيث أعطت محصول عالى (741.7 g ) , كفاءة حيوية عالية B.E.% ( 148.33%) بالإضافة الى عدد عالى من الثمار (11) .
4) هذه النتائج أكدت أهمية الطفرة CI-1(250 gy) تليها الطفرة CI-1(750 gy) في برامج التربية والإنتاج التالية للمشروم الميلكى Calocybe indica .
iii. التحليل الكيميائى لسلالات المشروم الميلكى Calocybe indica وطفراتها .
A. محتوى البروتين الكلى .
1. محتوى البروتين الكلى لكل سلالة شاملة كل جرعات الاشعاع تراوح بين 23.48% (CI-2 ) الى 24.05% (CI-1 ) بمتوسط 23.7% .
2. جرعة الاشعاع 750 جراى (لكل السلالات )أعطت أعلى نسبه بروتين (24.58%) تليها جرعة الاشعاع 250 جراى (24.38% )
3. 100% من الطفرات أعطت زيادة ملحوظة في محتوى البروتين في حين الطفرة CI-3(10 gy) أعطت أعلى محتوى بروتين كلى (26.14±0.02 %) مقارنه بكل الآباء والطفرات .
B. محتوى الكربوهيدرات الكلى .
1) محتوى الكربوهيدرات لكل سلالة تراوح من 23.78 % (CI-1 ) الى 24.55 % (CI-3 ) بمتوسط 24.15 % .
2) جرعة الاشعاع 250 gy أعطت أكبر محتوى كربوهيدراتى 26.81 % لكل السلالات تليها الجرعة 750 gy (25.5 %) .
3) 73% من الطفرات أعطت زيادة ملحوظة في نسبة الكربوهيدرات بينما الطفرة CI-1(250 gy) أعطت أعلى محتوى من الكربوهيدرات الكلية (27.55 ± 0.8 %) عند مقارنتها بكل الإباء والطفرات .
C. تقدير الفينولات الكلية .
1. المحتوى الفينولى الكلى لكل سلالة تراوح بين 9.19 % (CI-2 ) الى 9.75 % (CI-3 ) بمتوسط 9.4 % .
2. جرعة الاشعاع 10 جراى أعطت أعلى محتوى فينول كلى 10.9 % لكل السلالات تليها الجرعة 250 جراى (9.95 %).
3. 60% من الطفرات أنتجت زيادة ملحوظة في المحتوى الفينولى الكلى بينما الطفرة CI-1(10 gy) أعطت أعلى محتوى من الفينول الكلى (12.05 ± 0.72 %) عند مقارنتها بكل الاباء والطفرات .
D. تحليل ال DPPH : في اختبار أزاحة الشقوق الحرة تم استخدام اختبار DPPH وكانت النتائج كالتالى :
1. أعلى نسبة إزاحة للشقوق الحرة كانت مؤشر على القدرة العالية للمادة المستخلصة كمضاد للأكسدة .
2. السلالة CI-3 )شاملة كل جرعات الاشعاع (كان مستخلصها الأعلى كمضاد للأكسدة (7.26±0.49 %) مقارنة بباقى السلالات .
3. 93% من الطفرات أعطت زيادة في نشاط مضادات الاكسدة ( اختبار إزاحة الشقوق الحرة مع مادة DPPH ) في حين أن الطفرة CI-3(10 gy) أعلى قدرة كمضاد للأكسدة وازاحة للشقوق الحرة (10.37 ± 0.23 %) تليها الطفرة CI-2(1000 gy) (7.94 ± 0.25 %) عند مقارنتها بكل الآباء والطفرات .
4. هذه النتائج أشارت الى أن مستخلص الميثانول من المشروم الميلكى Calocybe indica محل الدراسة له القدرة على اعطاء ذرات الهيدروجين للوسط مما يساعد فى عملية ربط الشقوق الحرة وازاحتها .
E. فيتامين سى .
1. محتوى فيتامين سى لسلالات المشروم الميلكى ( شاملة كل جرعات الاشعاع( ترواح بين 38.33 mg/100g (CI-1 ) الى 56.98 mg/100g (CI-2 ) بمتوسط 49.73 mg/100g .
2. جرعة الاشعاع 10 جراى أعطت أعلى محتوى من فيتامين سى (64.20 mg/100g ) لكل السلالات تليها جرعة الاشعاع 250 جراى (54.65 mg/100g ) .
3. 73% من الطفرات أنتجت زيادة ملحوظة في محتوى فيتامين سى في حين أن الطفرة CI-2(250 gy) أعطت أعلى محتوى لفيتامين سى (73.15 mg/100g) عند مقارنتها بكل الاباء والمعاملات تليها الطفرة CI-3(10 gy) (71.019 mg/100g) .
F. محتوى العناصر .
محتوى الكالسيوم (0.73 % ) والبوتاسيوم (26.54 ppm ) للسلالة CI-3 ( شاملة كل جرعات الاشعاع 0,10,250,500,750,1000 جراى ) أعلى من باقى السلالات بينما محتوى السيلينيوم للسلالة CI-1 (3.5 ppm) أعلى قليلا مقارنه بالسلالات الاخرى كما أن جرعات الاشعاع المستخدمة لم تظهر تأثير منظم على محتوى العناصر
iv. دراسة الطفرة بواسطة التفريد الكهربى لبروتين السلالة CI-1 وطفراتها :
1) التفريد الكهربى لبروتينات ستة عينات من المشروم الميلكى Calocybe indica تشمل السلالة CI-1 وطفراتها أنتج 19 من حزم البروتينات تراوحت أوزانها من 8 الى 95 كيلو دالتون .
2) كل العينات الستة أظهرت 8 حزم بروتين monomorphic ذات اوزان جزيئية 8 ,13,17,28,36,38,50 and 52 كيلو دالتون بالاضافة الى سبعة حزم polymorphic ذات الاوزان الجزيئية 10,15,18,30,31,42 and 57 كيلو دالتون.
3) الكنترول أعطى فقط 11 حزمة من البروتين ذات اوزان جزيئية مختلفة منها ثلاثة حزم polymorphic بينما الطفرة CI1(10 gy) أعطت أعلى عدد من الحزم (19 حزمة ) منها أربعة حزم unique (لوحظت في هذه الطفرة فقط) ويمكن القول أن هذه البروتينات لعبت دور رئيسى في نمو الميسليوم بالنسبة لجرعة الاشعاع 10 جراى .
4) شجرة المسافات الوراثية المبنية على نتائج التفريد الكهربى للسلالة CI-1 وطفراتها قسمت الستة عينات الى مجموعتين رئيسيتين.