الفهرس 
INTRODUCTIONOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 111 |  |  |
| | | from | 111 | | |
Abstract
تعتبر الببتيدات النشطة بيولوجيا أجزاء من البروتين تحتوي على (2-20 حمض أميني). تم إجراء الكثير من الأبحاث على الببتيدات الحيوية وذلك بسبب تأثيراتها المفيدة على صحة الإنسان كمضادات للأكسدة، ومضادات للميكروبات، ومضادات للسرطان، ومضادات للالتهاب، ومضادات للسمنة، ومضادات لارتفاع ضغط الدم، لذلك يمكن استخدامها كأدوية طبيعية بدلاً من الأدوية الصناعية وذلك لانها آمنة على الصحة وليس لديها أي آثار جانبية.
تم اختيار كسب فول الصويا لإنتاج الببتيدات النشطة حيويا لاحتوائه على نسبة جيدة من الأحماض الأمينية الأساسية وغير الأساسية، كما أن نسبة البروتين الموجودة في كسب فول الصويا عالية. يعتبركسب فول الصويا منتجًا ثانويًا لفول الصويا. يستخدم كسب الصويا في تغذية الحيوان وذلك لأنه متوفر ورخيص الثمن ولتعظيم الاستفادة منه، فإنه يستخدم أيضا كمصدرللببتيدات النشطة حيويا.
الهدف من هذه الدراسة هو تحديد التركيب الكيميائي لـكسب فول الصويا، وعزل بروتين الصويا بواسطة نقطة التعادل الكهربى وتحديد الأحماض الأمينية لبروتين الصويا بواسطة جهازال GLC، وإجراء التحلل المائي لبروتين الصويا بواسطة إنزيم البيبسين، وتقدير الوزن الجزيئي لهذا البروتين والببتيدات الناتجة من التحلل المائى له بواسطة SDS-PAGE،ومن ثم تجزئة هذه الببتيدات عن طريق الترشيح الفائق والتعرف على هذه الببتيدات بواسطة جهازTriple-TOF ودراسة التأثيرات البيولوجية لـلببتيدات الحيوية كمضادات للميكروبات وللالتهابات وللسرطان.
ويمكن تلخيص النتائج التي تم التوصل إليها في النقاط التالية:
التركيب الكيميائي لكسب فول الصويا:
تم تحديد التركيب الكيميائي لكسب فول الصويا على أساس الوزن الجاف حيث أظهرت النتائج أنه يحتوي على (9.5%) رطوبة، (6.6%) رماد، (44.6%) بروتين، (2.1%) الدهون و(37.2% كربوهيدرات).
تحديد الأحماض الأمينية لبروتين كسب فول الصويا:
أظهرت النتائج أن بروتين الصويا يحتوي على كمية كبيرة من الأحماض الأمينية غير الأساسية. حيث كانت الأحماض الأمينية غير الأساسية تسعة بنسبة(59.83٪) وكانت أعلى نسبة لـ Glu و Gly، وكانت الأحماض الأمينية الأساسية أيضًا تسعة بنسبة (35.69٪) وكانت النسبة المئوية الرئيسية لـ Arg و Phe.
تقدير الوزن الجزيئى لبروتين الصويا والببتيدات الناتجة من التحليل المائى:
تم تحديد الوزن الجزيئي لبروتين الصويا والببتيدات الحيوية بواسطة SDS-PAGE حيث أظهرت النتائج أن إنزيم الببسين يحلل البروتين إلى جزيئات صغيرة تسمى الببتيدات النشطة بيولوجيا وهذا ما ظهر من غياب ووجود بعض البندات في الجل، وتراوح الوزن الجزيئي ما بين 20 و120 كيلو دالتون وكان الجل يحتوى على 15 من البندات .
التعرف على الببتيدات النشطة بيولوجيا بواسطة جهاز Triple-TOF
تم التعرف على الببتيدات التي تم الحصول عليها بعد الترشيح الفائق (<10 كيلو دالتون) بواسطة Triple-TOF، وأظهرت النتائج أنه يوجد 23 ببتيدًا . تتراوح أوزانها الجزيئية من830.49 إلى 2125.14 دالتون. وأظهرت النتائج أن إجمالي الببتيدات وزنها الجزيئي 44484.46 دالتون وكتلة الببتيدات أحادية النظائرهى 44456.69 دالتون، وقيمة نقطة التعادل الكهربى هى 4.65 وعدد الأحماض الأمينية هو 403 حمض أمينى، موزعة على النحو التالي 3.5% ألانين، 7.9% حمض الأسبارتيك، 5.7% حمض الجلوتاميك، 2.5% أرجينين، 0.2% سيستين، 4.7% أسباراجين، 5.0% جلوتامين، 2.0% هيستيدين، 12.9% ليوسين، 2.5% ميثيونين، 6.0% برولين، 1.0% تريبتوفان، 5.2% فالين، 9.2% سيرين، 5.5 % ليسين، 4.0% فينيل ألانين، 1.5% تيروزين، 6.9% آيزوليوسين، 6.9% جلايسين، و6.9% ثريونين.
كان إجمالي عدد أحماض الأسبارتيك والجلوتاميك التي تمثل الشحنة السالبة 55 وحدة بنائية للببتيدات، بينما إجمالي عدد الأرجينين والليسين التي تمثل الشحنة الموجبة كان 32 وحدة بنائية للببتيدات.
التأثيرات البيولوجية للببتيدات النشطة حيويا:
تم تجزئة الببتيدات التي تم الحصول عليها بعد التحلل المائي بواسطة البيبسين عن طريق الترشيح الفائق إلى ببتيدات (<10 كيلو دالتون) التي تسمى الببتيدات 1 وببتيدات (>10 كيلو دالتون) والتي تسمى الببتيدات 2، وتم اختبار هذه الببتيدات كعوامل مضادة للالتهابات وللميكروبات و للسرطان.
تأثيرالببتيدات النشطة حيويا المضاد للالتهابات:
تم اختبار الببتيدات 1و2 كمثبطات لـ NO بتركيزات مختلفة باستخدام خلايا RAW 264.7 وأظهرت تأثيرًا جيدًا ضد NO في التركيز 400 ميكروجرام/مل وذلك لمدة 24 ساعة. كانت قيم الببتيدات 1 و هى 2 24.9% و29.7% على التوالي كمثبطات لـ NO.
تأثير الببتيدات النشطة حيويا المضاد للميكروبات :
تم اختبار الببتيدات 1 و 2 ضد أربعة سلالات من البكتيريا المسببة للأمراض بتركيز 1000 ميكروجرام/مل وذلك لمدة 24 ساعة. الميكروبات المستخدمة هى (E. Coli ATCC 8739، P. aeruginosa ATCC 6538، L. monocytogenes ATCC 13932 و B. cereus ATCC 9634). أظهرت النتائج أن تأثير الببتيدات 1 و 2 كان متساويا ضد الميكروبات. أقل تركيز مثبط من الببتيدات كان (0.25 ملجم/مل) ضد E. Coli وكانت منطقة التثبيط لها 19 ملم.
تأثير الببتيدات النشطة حيويا المضاد للسرطان :
تم استخدام خلايا HCT-116 لقياس قدرة الخلايا على تثبيط سرطان القولون و استخدام الببتيدات 1 و2 بتركيزات مختلفة لمدة 48 ساعة و 72 ساعة، ولكن أفضل تأثير للببتيدات كان عند تركيز 2000ميكروجرام/مل و أظهرت الببتيدات 2 تأثيرًا أعلى من الببتيدات 1 وهذا ما أظهره IC50 للببتيدات 1 حيث كان (> 2000 ميكروجرام/ مل، 2380.22 ميكروجرام/ مل) لمدة 48 ساعة و72 ساعة على التوالي، لكن الببتيدات 2 كانت (755.38 ميكروجرام/ مل ، 547.51 ميكروجرام/ مل) لمدة 48 ساعة و72 ساعة على التوالى ونجد أن الببتيدات1 ثبطت سرطان القولون بنسبة (39.8 ، 46.0%)، ولكن الببتيدات 2 ثبطت سرطان القولون بنسبة (96.3 ، 98.5%) وذلك لمدة 48 و 72 ساعة على التوالى وذلك عند أعلى تركيز لهما.
تم استخدام خلايا HepG-2 لتحديد نشاط الببتيدات 1 و 2 ضد سرطان الكبد. حيث تم اختبار الببتيدات بتراكيز مختلفة وكان أعلى تأثير عند تركيز 2000ميكروجرام/مل. وكان الببتيدات 2 أفضل من الببتيدات 1 في تثبيط سرطان الكبد. حيث كانت IC50 للببتيدات 1 (> 2000 ميكروجرام/ مل، > 2000 ميكروجرام/ مل) لمدة 48 ساعة و72 ساعة على التوالي، لكن IC50 للببتيدات 2 كان (809.34 ميكروجرام/ مل، 643.04 ميكروجرام/ مل) لمدة 48 ساعة و72 ساعة على التوالى، ونجد أن الببتيدات1ثبطت سرطان الكبد بنسبة (7.7 ، 16.0%)، ولكن الببتيدات 2 ثبطت سرطان الكبد بنسبة (80.4، 98.6%) لمدة 48 و 72 ساعة على التوالى وذلك عند أعلى تركيز لهما.
التوصية:
من النتائج المذكورة يمكن التوصية بأن الببتيدات النشطة بيولوجيا التي تم الحصول عليها من كسب فول الصويا عن طريق التحلل المائي الأنزيمي بالببسين يمكن استخدامها كعوامل مضادة للسرطان وذلك بتركيز 2000 ميكروجرام/ مل لمدة 72 ساعة وعوامل مضادة للالتهابات بتركيز 400 ميكروجرام/مل لمدة 24 ساعة وكعوامل المضادة للميكروبات عند تركيز 1000 ميكروجرام/ مل لمدة 24 ساعة، وبسبب آثارها المفيدة يمكن استخدامها كمصدر طبيعي لعلاج هذه الأمراض الخطيرة بدلاً من الأدوية المصنعة التي لها آثار جانبية على الصحة.