الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 215 |  |  |
| | | from | 215 | | |
Abstract
دراسة عن الفطريات المتكافلة المصاحبة لبعض النباتات الطبية
الفطريات المتكافلة المصاحبة للنباتات هي فطريات تعيش بين الأنسجة الداخلية السليمة للنباتات، مما يكشف عن علاقة فريدة من نوعها بينهما، بها يستفيد النبات العائل والفطر المتكافل كلًا منهما من الآخر.
تفرز هذه الفطريات المتكافلة عددًا كبيرًا من النواتج الطبيعية ذات التركيبات الكيميائية واسعة التنوع. وقد أظهرت الكثير من المركبات المفصولة من تلك الفطريات تأثيرات بيولوجية مبشرة مما يمهد الطريق للعثور على مرشحين محتملين للأدوية في مجال الأبحاث الصيدلية وصناعة اكتشاف الدواء.
الهدف من هذا البحث هو إجراء دراسة كيميائية وبيولوجية للفطريات الداخلية المصاحبة للفاكهة الصالحة للأكل -الرمان. الرمان هو فاكهة ذات قيمة عالية ومعروفة في الطب الشعبي لعلاج الصداع ومشاكل المعدة واللويحات ونزيف اللثة والالتهابات الطفيلية. علاوة على ذلك، فهو نبات يحظى بأهمية طبية عالية، حيث إنه غني بالمركبات ذات الحيوية البيولوجية وخاصة من نوعية البوليفينولات، وتظهر أنشطة كمضادات للميكروبات وللأكسدة وللالتهابات وللسرطانات.
تم عزل الفطرTalaromyces purpureogenus من ثمار الرمان وخضع لتحاليل كيميائية مختلفة لفصل النواتج الطبيعية بالإضافة إلى إجراء الدراسات البيولوجية والتي اشتملت على قياس نشاط إبادة اليرقات وقياس النشاط المضاد لمختلف الميكروبات الفطرية والبكتيريا المسببة للأمراض، وقياس النشاط المضاد للبكتيريا المسببة لمرض الدرن. وقد تمت الدراسات البيولوجية لخلاصة الفطر، والأجزاء المفصولة منه، والمركبات النقية التي تم فصلها.
اشتملت الرسالة المقدمة على:
1. دراسة كيميائية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus.
2. دراسة بيولوجية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus.
الجزء الأول
دراسة كيميائية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus
1. فصل وتنقية وزراعة أنواع الفطريات
تم فصل خمس فطريات من الأنسجة الداخلية السليمة لثمرة Punica granatum. وقد تمت زراعة كلًا منهم على الأرز كوسيط للزراعة ثم استخلاصه بخلات الإيثيل. أظهر الفحص باستخدام TLC أن الفطر ذو الكود ”AMP-R-2” هو الأصلح للاختيار حيث يملك أكبر كثافة من المركبات. بالإضافة لذلك، بالمقارنة بين الخلاصات الخمس من ناحية الوزن وبمراجعة الأبحاث المنشورة على كل فطر، كلها كانت عوامل تم الاستعانة بها لتحديد الاختيار المناسب ألا وهو ”Talaromyces purpureogenus”. وقد شكّل اللون الأحمر لخلاصة هذا الفطر عامل جذب آخر نسبة للتشابه مع خلاصة فاكهة الرمان.
2. تعريف أنواع الفطريات المفصولة
لقد تم تعريف الفطريات المفصولة باستخدام بروتوكول البيولوجيا الجزيئية الذي يشتمل على تضخيم الحمض النووي وتعريف تسلسل ITS، وأتبع ذلك تسجيل البيانات التعريفية للفطر ”T. purpureogenus” على Genbank بكود OM367903
3. استخلاص الفطريات المفصولة واختيار الفطر المناسب
تم استخلاص الفطريات باستخدام المذيب EtOAc، ثم تم اختيار الفطر الأنسب للدراسة الكيميائية والبيولوجية المستفيضة بناءا على عوامل عدة، وهو الفطر Talaromyces purpureogenus.
4. فصل وتعريف المركبات المعزولة من خلاصة خلات الإيثيل لفطر ”Talaromyces purpureogenus”
بإجراء الفحص الكيميائي لخلاصة الفطر T. purpureogenus باستخدام تقنيات كروماتوجرافية مختلفة، أدى ذلك لفصل ست مركبات نقية. وعلاوة على ذلك، فقد تم توضيح التركيب البنائي للمركبات عن طريق الوسائل الطيفية المختلفة والتي تضمنت MS وNMR.
المركبات التي تم فصلها وتعريفها:
مركبان جديدان منتميان لفصيلة الميروتربينويدات
مركبان سبق التعرف عليهما منتميان لفصيلة الميروتربينويدات
مركبان سبق التعرف عليهما منتميان لفصيلة البوليكيتيدات
وقد تم تحديد التركيب الكيميائي المجسم للمركبات الجديدة وذلك باستخدام حسابات OR وECD.
الجزء الثاني
دراسة بيولوجية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus
1. التأثير المضاد ليرقات البعوضة Culex pipiens بواسطة خلاصة الفطر
تم القيام باختبار لقياس تأثير خلاصة الفطر على اليرقات في الطور الثالث من النمو، عن طريق قياس نسبة الوفيات من اليرقات بعد التعرض لخلاصة الفطر بمدة 24 و48 و72 و96 ساعة باستخدام طريقة الغمر. أوضحت النتائج أن الخلاصة لها تأثير معتمد على الوقت والجرعة حيث يتناسب التأثير طرديا مع كليهما. النتائج الأفضل تم التوصل لها بعد 96 ساعة وتليها التأثير بعد 72 ساعة.
2. تأثير الخلاصة والأجزاء المفصولة ضد الميكروبات
2-1. التأثير المضاد للبكتيريا
بإجراء اختبار التأثير المضاد للبكتيريا على الخلاصة الكلية للفطر والأجزاء F-3‵ وF-4، تبين أن الخلاصة لها تأثير واعد حيث أظهرت نتائج تتراوح من منخفضة إلى متوسطة على البكتيريا الخاضعة للاختبار، أما الأجزاء F-4 وF-3‵ أظهروا نشاطا متوسطا ضد بكتيريا Bacillus subtilis. كما أظهرت النتائج أن الجزء F-4 فعالا ضد البكتيريا المسببة لمرض الدرن Mycobacterium tuberculosis بقيمة MIC 15,63 ميكروجرام/مل.
2-2. التأثير المضاد للفطريات
بقياس فاعلية خلاصة الفطر والأجزاء F-3‵ وF-4 ضد الفطريات، تبين أن الأجزاء F-4 وF-3‵ لهم تأثير ضد فطر Cryptococcus neoformans متبوع بنشاطهم المضاد للفطر Syncephalastrum racemosum.
3. تأثير المركبات المفصولة ضد الميكروبات
أجريت أبحاث التأثير المضاد للبكتيريا Staphylococcus aureus وMRSA والبكتيريا المسببة لمرض الدرن M. tuberculosis وأوضحت النتائج أن المركب الخامس له فاعلية مضادة للبكتيريا MRSA بقيمة MIC 25 ميكرومولار، وفاعلية مضادة للبكتيريا S. aureus بقيمة MIC 100 ميكرو
دراسة عن الفطريات المتكافلة المصاحبة لبعض النباتات الطبية
الفطريات المتكافلة المصاحبة للنباتات هي فطريات تعيش بين الأنسجة الداخلية السليمة للنباتات، مما يكشف عن علاقة فريدة من نوعها بينهما، بها يستفيد النبات العائل والفطر المتكافل كلًا منهما من الآخر.
تفرز هذه الفطريات المتكافلة عددًا كبيرًا من النواتج الطبيعية ذات التركيبات الكيميائية واسعة التنوع. وقد أظهرت الكثير من المركبات المفصولة من تلك الفطريات تأثيرات بيولوجية مبشرة مما يمهد الطريق للعثور على مرشحين محتملين للأدوية في مجال الأبحاث الصيدلية وصناعة اكتشاف الدواء.
الهدف من هذا البحث هو إجراء دراسة كيميائية وبيولوجية للفطريات الداخلية المصاحبة للفاكهة الصالحة للأكل -الرمان. الرمان هو فاكهة ذات قيمة عالية ومعروفة في الطب الشعبي لعلاج الصداع ومشاكل المعدة واللويحات ونزيف اللثة والالتهابات الطفيلية. علاوة على ذلك، فهو نبات يحظى بأهمية طبية عالية، حيث إنه غني بالمركبات ذات الحيوية البيولوجية وخاصة من نوعية البوليفينولات، وتظهر أنشطة كمضادات للميكروبات وللأكسدة وللالتهابات وللسرطانات.
تم عزل الفطرTalaromyces purpureogenus من ثمار الرمان وخضع لتحاليل كيميائية مختلفة لفصل النواتج الطبيعية بالإضافة إلى إجراء الدراسات البيولوجية والتي اشتملت على قياس نشاط إبادة اليرقات وقياس النشاط المضاد لمختلف الميكروبات الفطرية والبكتيريا المسببة للأمراض، وقياس النشاط المضاد للبكتيريا المسببة لمرض الدرن. وقد تمت الدراسات البيولوجية لخلاصة الفطر، والأجزاء المفصولة منه، والمركبات النقية التي تم فصلها.
اشتملت الرسالة المقدمة على:
1. دراسة كيميائية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus.
2. دراسة بيولوجية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus.
الجزء الأول
دراسة كيميائية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus
1. فصل وتنقية وزراعة أنواع الفطريات
تم فصل خمس فطريات من الأنسجة الداخلية السليمة لثمرة Punica granatum. وقد تمت زراعة كلًا منهم على الأرز كوسيط للزراعة ثم استخلاصه بخلات الإيثيل. أظهر الفحص باستخدام TLC أن الفطر ذو الكود ”AMP-R-2” هو الأصلح للاختيار حيث يملك أكبر كثافة من المركبات. بالإضافة لذلك، بالمقارنة بين الخلاصات الخمس من ناحية الوزن وبمراجعة الأبحاث المنشورة على كل فطر، كلها كانت عوامل تم الاستعانة بها لتحديد الاختيار المناسب ألا وهو ”Talaromyces purpureogenus”. وقد شكّل اللون الأحمر لخلاصة هذا الفطر عامل جذب آخر نسبة للتشابه مع خلاصة فاكهة الرمان.
2. تعريف أنواع الفطريات المفصولة
لقد تم تعريف الفطريات المفصولة باستخدام بروتوكول البيولوجيا الجزيئية الذي يشتمل على تضخيم الحمض النووي وتعريف تسلسل ITS، وأتبع ذلك تسجيل البيانات التعريفية للفطر ”T. purpureogenus” على Genbank بكود OM367903
3. استخلاص الفطريات المفصولة واختيار الفطر المناسب
تم استخلاص الفطريات باستخدام المذيب EtOAc، ثم تم اختيار الفطر الأنسب للدراسة الكيميائية والبيولوجية المستفيضة بناءا على عوامل عدة، وهو الفطر Talaromyces purpureogenus.
4. فصل وتعريف المركبات المعزولة من خلاصة خلات الإيثيل لفطر ”Talaromyces purpureogenus”
بإجراء الفحص الكيميائي لخلاصة الفطر T. purpureogenus باستخدام تقنيات كروماتوجرافية مختلفة، أدى ذلك لفصل ست مركبات نقية. وعلاوة على ذلك، فقد تم توضيح التركيب البنائي للمركبات عن طريق الوسائل الطيفية المختلفة والتي تضمنت MS وNMR.
المركبات التي تم فصلها وتعريفها:
مركبان جديدان منتميان لفصيلة الميروتربينويدات
مركبان سبق التعرف عليهما منتميان لفصيلة الميروتربينويدات
مركبان سبق التعرف عليهما منتميان لفصيلة البوليكيتيدات
وقد تم تحديد التركيب الكيميائي المجسم للمركبات الجديدة وذلك باستخدام حسابات OR وECD.
الجزء الثاني
دراسة بيولوجية لخلاصة الفطر Talaromyces purpureogenus
1. التأثير المضاد ليرقات البعوضة Culex pipiens بواسطة خلاصة الفطر
تم القيام باختبار لقياس تأثير خلاصة الفطر على اليرقات في الطور الثالث من النمو، عن طريق قياس نسبة الوفيات من اليرقات بعد التعرض لخلاصة الفطر بمدة 24 و48 و72 و96 ساعة باستخدام طريقة الغمر. أوضحت النتائج أن الخلاصة لها تأثير معتمد على الوقت والجرعة حيث يتناسب التأثير طرديا مع كليهما. النتائج الأفضل تم التوصل لها بعد 96 ساعة وتليها التأثير بعد 72 ساعة.
2. تأثير الخلاصة والأجزاء المفصولة ضد الميكروبات
2-1. التأثير المضاد للبكتيريا
بإجراء اختبار التأثير المضاد للبكتيريا على الخلاصة الكلية للفطر والأجزاء F-3‵ وF-4، تبين أن الخلاصة لها تأثير واعد حيث أظهرت نتائج تتراوح من منخفضة إلى متوسطة على البكتيريا الخاضعة للاختبار، أما الأجزاء F-4 وF-3‵ أظهروا نشاطا متوسطا ضد بكتيريا Bacillus subtilis. كما أظهرت النتائج أن الجزء F-4 فعالا ضد البكتيريا المسببة لمرض الدرن Mycobacterium tuberculosis بقيمة MIC 15,63 ميكروجرام/مل.
2-2. التأثير المضاد للفطريات
بقياس فاعلية خلاصة الفطر والأجزاء F-3‵ وF-4 ضد الفطريات، تبين أن الأجزاء F-4 وF-3‵ لهم تأثير ضد فطر Cryptococcus neoformans متبوع بنشاطهم المضاد للفطر Syncephalastrum racemosum.
3. تأثير المركبات المفصولة ضد الميكروبات
أجريت أبحاث التأثير المضاد للبكتيريا Staphylococcus aureus وMRSA والبكتيريا المسببة لمرض الدرن M. tuberculosis وأوضحت النتائج أن المركب الخامس له فاعلية مضادة للبكتيريا MRSA بقيمة MIC 25 ميكرومولار، وفاعلية مضادة للبكتيريا S. aureus بقيمة MIC 100 ميكرو