الفهرس 
Hericium erinaceus and Grifola frondosaOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 370 |  |  |
| | | from | 370 | | |
Abstract
الملخص العربي
التأثير المناعي لبعض الإيضات الفطرية علي بعض أنواع الخلايا السرطانية أو المصابة بالفيروس
الهدف من هذه الدراسة هو تحديد الأيضات الفطرية التي قد يكون لها تأثير سام للخلايا ومعدّل مناعي على الخلايا المصابة بالسرطان أو الفيروس، متبوعًا بتوصيف وتركيب نواتج الأيض المستخلصة لغرض الاستهلاك البشري. لذلك ولتحقيق هذا الهدف كانت هناك حاجة إلى جمع عزلات من الفطر من مواقع زراعية مختلفة، يتبع ذلك استخلاص نواتج الأيض من المستخلصات الفطرية المجمعة. أُجرية تجارب لتقييم الأنشطة السامة لمستخلصات الفطر ضد ” Peripheral Blood Mononuclear Cells”. أُجري تقييم التأثيرات المناعية للأيضات المختارة، والتي أظهرت أقل سمية خلوية على بعض الخلايا المصابة بالسرطان أو الفيروس وتوصيف الأيضات التي تظهر تأثيرات مناعية واعدة.
لا تزال البشرية تعاني من السرطان، والذي هو مرض يرتبط بنمو الخلايا غير المنضبطة حيث أنه في عام 2013،أظهرت الإحصائيات العالمية أنه من بين الأسباب الرئيسية للوفاة، ويأتي في المرتبة الثانية بعد أمراض القلب والأوعية الدموية. تشير التقديرات إلى أن الوفيات بسبب السرطان سترتفع إلى ثلاثة عشر مليونا في عام 2030. وهناك حاجة للبحث عن منتجات طبيعية مضادة للسرطان.
خلال هذه الدراسة ، أظهرت النتائج وجود مكونات ذات أنشطة بيولوجيًة متنوعة للخمسة أنواع من الفطر الذين تم استخدامهم في هذه الدراسة. وقد تم تحديدانواعه على النحو التالي: الفطر المحاري الشائع، الفطر المحاري الكولومبي، الفطر المحاري الرئوي، فطر الشيتاكي، وفطر غاريقون ثنائي البوغ من خلال دراسة تسلسل الفواصل الداخلية المسجلة (ITS sequenceing ) وادخال نتائج التسلسل لتحليلها في قاعدة بيانات المركز الوطني لمعلومات التقانة الحيوية (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) عبر برنامج أداة تقصي التراتب الموضعي الأساسي للتماثل من أجل تحديد الفطر المحتمل المعني. وقد تم إيداع التسلسلات في بنك الجينات (جين-بنك®) بأرقام الدخول MK603976 وMZ642245 وMZ642259 وMN622787 وMZ642282 على التوالي.
أظهرت نتائج توصيف المكونات النشطة بيولوجيًا للمستخلصات المائية للفطرالمجمع أن محتويات الكربوهيدرات والبروتينات والفينول والفلافونويد الكلية بها اختلافات مميزة بين أنواع الفطر الخمسة. يحتوي مستخلص الفطر المحاري الكولومبي على أعلى محتوى كربوهيدرات وأقل محتوى فينولي، ويحتوي مستخلص الفطر المحاري الشائع على ثلاثة أضعاف كمية الكربوهيدرات وضعف كمية البروتينات الموجودة في فطر الشيتاكي. ومن الجدير بالذكر أنه لم يُثبت اكتشاف مركبات الفلافونويد في مستخلص الفطر المحاري الكولومبي ولم تكن هناك كربوهيدرات في مستخلص الفطر المحاري الرئوي. وأُثبت العثور على مركب كاتيشين في جميع مستخلصات الفطر المدروسة (وقت الاستبقاء 26.48 دقيقة)، وأُثبت اكتشاف حمض الكلوروجينيك في مستخلصات الفطر المحاري الرئوي وفطر غاريقون ثنائي البوغ في وقت الاستبقاء 29.61 دقيقة، وأُثبت العثور على حمض الغاليك في مستخلصات الفطر المحاري الكولومبي والفطر المحاري الرئوي في وقت الاستبقاء 12.22 دقيقة. إضافة إلى ذلك يحتوي الفطر المحاري الشائع على مركب كايمبفيرول ومركب أبيجينين (أُثبت اكتشافه في أوقات الاستبقاء 59.13 دقيقة و59.56 دقيقة على التوالي)، بينما يحتوي فطر الشيتاكي على كيرسيتين (وقت الاستبقاء = 56.86 دقيقة). ولم يُثبت الكشف عن حمض الكافيك وهسبريدين وروتين وحمض الإيلاجيك في أي من مستخلصات الفطر. وقد تم تأكيد النتائج من خلال تحليل عينات من مزيج من الفينولات والفلافونويد القياسية التي أظهرت نفس أوقات الاستبقاء بتلك التي أُثبت اكتشافها في مستخلصات الفطر.
خلال الدراسة تم عمل تحاليل إضافية لمستخلصات الفطرالخمسة بإستخدام جهاز الكروماتوغرافي السائل عالى الكفاءة واثبتت النتائج على ان مجموعة الفطر تحتوي على مجموعة من الفيتامينات القابلة للذوبان في الماء واخرى في الدهون. وقد تبين من النتائج ان جميع الفطريات غنية بفيتامين ج و تحتوي على كميات مناسبة من فيتامين ب 3، فيتامين ب 6 وفيتامين د. وتبين من النتائج ان فيتامين ب2 موجود فقط في فطرغاريقون ثنائي البوغ. من ناحية أخرى؛ لم يُثبت اكتشاف الفيتامينات ب 1، فيتامين ب 9، وفيتامين أ، وفيتامين هـ في مجموعة الفطر الخمسة.
واثبتت نتائج التحليل ان هناك مجموعه كبيرة من الأحماض الأمينية في مستخلصات الفطر، باستثناء الهيستيدين وحمض الأسبارتيك التي لم يُثبت الكشف عنها. وقد اثبتت النتائج أن حمض الجلوتاميك كان الحمض الأميني الرئيسي في جميع مستخلصات الفطر المحاري. وكان إجمالي محتويات الأحماض الأمينية 5.41 و5.04 و5.75 و4.35 و5.58 في الفطر المحاري الشائع والفطر المحاري الكولومبي والفطر المحاري الرئويو فطر الشيتاكي وفطر غاريقون ثنائي البوغ ،على التوالي.
وقد تم إجراء تحليل البروتين باستخدام ” LC-Triple TOF-MS analysis ” بمعدل اكتشاف زائف أقل من 5٪ و95٪ ثقة في تحديد الهوية. وأظهرت النتائج ان الفطر المحاري الشائع والفطر المحاري الكولومبي والفطر المحاري الرئوي وفطر الشيتاكي وفطرغاريقون ثنائي البوغ يحتوي على 753 و541 و402 و432 و408 بروتينا ،على التوالي. واظهرت نتائج التحاليل على وجود سيتوكروم سي أكسيداز وسوبرأكسيد ديسميوتاز ومختزلة الثيوريدوكسين وبروتيناز السيرين وبيروفات كايناز وكاتالاز ويوبيكويتين كبروتين في جميع أنواع الفطر. وتم التعرف على بليوروتوليسين وأوستروليسين وليكتين في أنواع فطر المحاري. بينما اظهرت النتائج عن وجود بروتين لاتكريبين وبروتين يحتوي على فالوسين في فطر الشيتاكي. وبالنسبة للبروتينات النشطة بيولوجيا : سوبر أكسيد ديسميوتا و Rab GDP dissociation inhibitonوثيردوكسين ريديكتيز وليكتين، اثبت وجودها في مستخلصات الفطر المحاري الشائع وفطر الشيتاكي.
وخلال الدراسة تم تقييم الأنشطة البيولوجية للمستخلصات المائية لمجموعة الفطر المختبرة ضد الفيروس الغدي البشري من النوع 7 وفيروس الهربس البسيط من النوع 2. وأُثبت النتائج على وجود أنشطة فعالة مضادة للفيروسات ذات سمية منخفضة نسبيا في الفطر المحاري الكولومبي ضد الفيروس الغدي البشري من النوع 7 وفطر غاريقون ثنائي البوغ ضد فيروس الهربس البسيط من النوع 2. وأظهر مستخلص الفطر المحاري الشائع نشاطًا فعالًا مضادًا للفيروسات ضد الفيروس الغدي، بمؤشر انتقائي مرتفع يصل إلى 4.5. كما أُثبت تسجيل تأثيرات واعدة مضادة للفيروسات لمستخلص الفطر المحاري الشائع ضد فيروس الهربس البسيط من النوع 2 وفطر الشيتاكي ضد كلا الفيروسين.
وقد ظهرت بعض نتائج تقييم النشاط المضاد للفيروسات بشكل مثير للاهتمام أن عينات الفطر المختبرة لها نشاطًا واعدًا ضد فيروس كورونا SARS-Cov2، وأعلنت أن الأنشطة المضادة للفيروسات ذات المؤشر الانتقائي المرتفع هي 4.34 و3.44 للفطر المحاري الشائع وفطر الشيتاكي ، على التوالي ،في حين لوحظ المؤشر الانتقائي منخفض هو 1.5 مع فطر غاريقون ثنائي البوغ للنشاط المضاد للفيروسات بالنسبة للسمية الخلوية.
كما اثبتت النتائج ان مستخلصات الفطر الخمسة (الفطر المحاري الشائع والفطر المحاري الكولومبي والفطر المحاري الرئوي وفطر الشيتاكي وفطر غاريقون ثنائي البوغ) ذات سمية خلوية منخفضة ضد الخلايا وحيدة النواة في الدم المحيطي البشري الطبيعي (IC50 µg/mL) 66.41 ± 3.7 و75.03 ± 0.62 و 70.41 ± 3.7 و 75.03 ± 1.82 و 70.41 ± و57.72 ± 0.95 على التوالي .
وقد تم اجراء اختبارات للسمية الخلوية لمستخلصات الفطر على مجموعة من خطوط الخلايا السرطانية وتشمل سرطان البروستاتا (DU-145 وPC3)؛ سرطان الخلايا الكبدية (HepG2)؛ سرطان القولون والمستقيم (Colo-205)؛ سرطان الأعور (LS-513)؛ سرطان عنق الرحم (HeLa)؛ وسرطان الثدي (MDA-MB-231 وMCF-7). واظهرت النتائج ان الفطر المحاري الرئوي وفطر غاريقون ثنائي البوغ سجل أعلى سمية خلوية لنوع LS-513 مع النسبة المئوية لصلاحية الخلايا 79.60 ± 0.53٪ و82.83 ± 0.42٪ على التوالي. وقد خفضت مستخلصات فطر الشيتاكي والفطر المحاري الشائع من النسبة المئوية لصلاحية الخلايا LS-513 وHepG2 وDU-145 وPC-3 بمقدار 20٪ تقريبا. كما قلل مستخلص فطر الشيتاكي و الفطر المحاري الكولومبي و غاريقون ثنائي البوغ من النسبة المئوية لصلاحية الخلايا THP1 إلى 66% و 75٪ و 79٪ ،على التوالي. في حين قلل مستخلص الفطر المحاري الشائع من صلاحية خلايا CCRF-CEM إلى 70.64٪ وانخفضت صلاحية خلايا NB4 إلى 80٪ بواسطة فطر الشيتاكي.
تمت دراسة نتائج التأثير المضاد للأكسدة من خلال طرق التقييم الثلاثة، وهي: المسح الجذري لـ 2.2 ثنائي فينيل-1- بيكريل هيدرازيل، وكسح الكاتيون الجذري 2.2’- أزينو مكرر (3-إيثيل بنزوثيازولين-6-حامض السلفونيك)، ومقايسات مقايسة قدرة امتصاص جذور الأكسجين. أظهر اختبار 2.2 ثنائي فينيل-1- بيكريل هيدرازيل أن قدرة كسح الجذور الحرة للفطر المحاري الشائع والفطر المحاري الكولومبي كانت أعلى بكثير من الفطر المحاري الرئوي و فطر الشيتاكي وفطر غاريقون ثنائي البوغ. أظهرت الكسح 2.2’- أزينو مكرر (3-إيثيل بنزوثيازولين-6-حامض السلفونيك) أن جميع مستخلصات الفطر ذات أنشطة مضادة للأكسدة أعلى من تلك الموجودة في مركب ترولوكس. إضافة الى ذلك أظهرت نتائج اختبار مقايسة قدرة امتصاص جذور الأكسجين أن الفطر المحاري الشائع والفطر المحاري الكولومبي والفطر المحاري الرئوي وفطر الشيتاكي تتمتع بقدرات أعلى بكثير من مضادات الأكسدة من فطر غاريقون ثنائي البوغ.
أجريت بعض التجارب على تقييم تأثير مستخلصات الفطر المدروس على النشاط المناعي بحيوانات التجارب، وقد اظهرت النتائج في المجموعات التجريبية المختلفة التي عولجت بمستخلصات الفطر الخمسة على وجود زيادة ملحوظة في تعداد كرات الدم البيضاء وعدد الخلايا الليمفاوية مقارنة بالمجموعة الضابطة التي عولجت بالديكساميثازون والتي أظهرت عددا أقل من كرات الدم البيضاء. من ناحية أخرى، أظهر تركيز الهيموغلوبين في الدم زيادة طفيفة بعد تناول أنواع الفطر مقارنة بمجموعة التحكم العادية.
وقد تم دراسة تأثير مستخلصات الفطر المدروس على معاملات الاستجابة المناعية غير النوعية عن طريق تقييم تركيز الليزوزيم في مصل الدم ، واثبتت المنتائج أن المجموعة المكملة بمستخلصات الفطر بجرعات مختلفة قد زادت من مستويات الليزوزيم إلى درجات متغيرة. وأظهر الفطر المحاري الشائع (400mg/kg) زيادة ملحوظة بنسبة 31٪ عن مجموعات التحكم العادية و52٪ عن الديكساميثازون وبنسبة 13٪ عن مجموعات التحكم في مستخلص القنفذية. كما أظهرت جرعة عالية من الجنبة الساجور-كاجو أيضا زيادة في نشاط الليزوزيم بنسبة 21٪ عن مجموعة التحكم العادية، وبنسبة 40٪ عن مجموعة التحكم بالديكساميثازون وبنسبة 5٪ عم مجموعة التحكم في مستخلص القنفذية.
وكذلك تم قياس تركيز أكسيد النيكتريك في مصل الدم واظهرت النتائج أن وجود فطر الجنبة الساجور-كاجو ادى الى زيادة ملحوظة في إفرازات أكسيد النيكتريك بنسبة 41٪ عن مجموعة التحكم بالديكساميثازون . كما أظهر الفطر المحاري الكولومبي زيادة بنسبة 27٪ من تركيز أكسيد النيكتريك من مجموعة التحكم العادية، و94٪ من مجموعة التحكم بالديكساميثازون و75٪ من مجموعة التحكم في مستخلص القنفذية. وكذلك أظهر فطر غاريقون ثنائي البوغ زيادة في مجموعة التحكم على الديكساميثازون بنسبة 49٪ ومجموعة التحكم في مستخلص القنفذية بنسبة 35٪.
أفادت الدراسة الحالية أن مجموعات الجرذان التي تتغذى على الفطر المحاري الشائع قد زادت من عامل نخر الورم- ألفا- إنترفيرون- غاما-انترفيرون وإنترلوكين-1 بيتا بنسبة 45٪ و74٪ و37٪ على التوالي من مجموعة التحكم بالديكساميثازون. وأظهر الفطر المحاري الكولومبي زيادة في عامل نخر الورم-الفا وإنترلوكين-1 بيتا بنسبة 31 ٪ وانترفيرون غاما بنسبة 90٪ من مجموعة التحكم بالديكساميثازون. أيضًا، أظهرت أنواع الفطر المحاري الرئوي زيادة بنسبة 72٪ من إنترلوكين-1 بيتا و58٪ من الانترفيرون-غاما ولا توجد زيادة كبيرة في عامل نخر الورم-الفا. أما بالنسبة لأنواع الفطر الأخرى مثل فطر الشيتاكي وفطر غاريقون ثنائي البوغ فلديهما زيادة طفيفة في مستوى السيتوكينات في الدم.