Search In this Thesis
   Search In this Thesis  
العنوان
Development of duplex real-time pcr assay for rapid diagnosis and differentiation of camel pox and pox-like viral diseases in camels /
المؤلف
Shehata, Amir Aly Mustafa.
هيئة الاعداد
باحث / أمير على مصطفى شحاته
مشرف / سعد شعراوى على شعراوى
مشرف / إيهاب مصطفى النحاس
مناقش / إيمان محمد أبو حطب
الموضوع
Camels Diseases.
تاريخ النشر
2021.
عدد الصفحات
80 p. :
اللغة
الإنجليزية
الدرجة
الدكتوراه
التخصص
Veterinary (miscellaneous)
تاريخ الإجازة
1/1/2021
مكان الإجازة
جامعة بنها - كلية الطب البيطري - الفيرولوجى
الفهرس
Only 14 pages are availabe for public view

from 103

from 103

Abstract

مرض الجدرى والامراض المماثله له هم عبارة عن مجموعة من الامراض التى تسبب آفات جلدية واسعة الانتشار فى الجمال. هذه الأمراض تشمل جدرى الجمال، إكزيما الجمال و بابيلوما الجمال والتى من الصعب تفريقها عن طريق الأعراض على الحيوان فقط.
فى الدراسة الحالية , تم تطوير إختبارين لتفاعل البلمرة المتسلسل الثنائى للتشخيص السريع والتفريق بين جدرى وإكزيما الجمال.
1. تطوير إختبار تفاعل بلمرة متسلسل ثنائى حقيقى الوقت للكشف السريع عن إثنين من جينات فيروس جدرى الجمال.
- تم تصميم الاختبار بدمج طقمين من المشخصات للكشف عن اثنين من جينات جدرى الجمال أحدهما هو جين انزيم بلمرة الحمض النووى ال دى اوكسى ريبوزى(DNA pol gene) وهو جين متشابه بين عدد من فيروسات الجدرى القريبه لفيروس جدرى الجمال ”Orthopoxviruses” و الجين الآخر” C18L” يكشف فقط عن فيروس جدرى الجمال.
- الإختبار أثبت انه متخصص للكشف عن فيروس جدرى الجمال وكانت النتيجة سلبية مع فيروسات جدرى الاغنام والماعز واكزيما الاغنام والجمال
- بسبب عدم توفر عينات لمرض جدرى الجمال، تم استخدام عينات سلبية لفيروس جدرى الجمال من حيوانات سليمة ثم تم تقسيمها الى جزئين وبعد ذلك تم حقن الجزء الثانى من كل عينة بالفيروس المرجعى لجدرى الجمال وتم استخدام تركيزات مختلفة من الفيروس المرجعى فى الحقن وبتقييم الاختبار على هذه العينات استطاع الكشف عن هذان الجينان فى كل العينات التى تم حقنها بالفيروس .
- حساسية الإختبار فى الكشف عن جين(DNA pol gene) وصلت الى 4 بيكوجرام من الحمض النووى للفيروس بينما للجين الآخر (C18L) وصلت الى 0.4 بيكو جرام من الحمض النووى للفيروس.
2. التشخيص الجزيئى لمرض إكزيما الجمال .
- ظهرت بعض الاعراض المشابهه للجدرى على بعض الجمال فى 2017-2018 فى قطر وبتجميع حوالى 20 عينة من الجمال المصابة واختبارها لفيروسى جدرى وإكزيما الجمال باختبار تفاعل البمرة المتسلسل والعمل التتابع الجينى تبين ان الفيروس المسؤل عن هذه الحالات هو إكزيما الجمال وانه متشابه مع حالات اخرى من البحرين وقريب جدا لحالات مشابهه سابقة فى السعودية والسودان وإثيوبيا.
- توافر فيروس إكزيما الجمال من هذه الجمال المصابة مكن من البدء بتطوير اختبارتفاعل بلمرة متسلسل ثنائى حقيقى الوقت للتشخيص السريع والتفريق بين مرضى جدرى و إكزيما الجمال.
3. تطوير إختبار تفاعل بلمرة متسلسل ثنائى حقيقى الوقت للتشخيص السريع والتفريق بين مرضى جدرى و إكزيما الجمال.
- تم تصميم الإختبار ليكشف عن فيروس جدرى الجمال هو المسبب لمرض الجدرى فى الجمال أما مرض إكزيما الجمال فله مسببان تم التعرف عليهما مسبقا وهما فيروس إكزيما الجمال والفيروس المسبب لإكزيما الأغنام والماعز وينتمى هذان الفيروسان لمجموعة البارابوكس “parapox virus genus” لذلك سيتم الاشارة لهما معا ب “camel parapox virus” أو فيروس بارابوكس الجمال وسيكون ذلك هو المسبب الثانى الذى يقوم الإختبار بكشفه.
- وجد بعد إجراء عدة إختبارات على هذه الفيروسات أن درجة الذوبان او التفكك لهذا النوع من الاختبارات و التى تحدد كل فيروس هى 76 درجة لفيروس جدرى الجمال و 85.8 درجة لفيروس بارابوكس الجمال.
- حساسية الاختبار وصلت إلى 20 نسخة من الحمض النووى لكل من فيروسى جدرى و إكزيما الجمال.
- تم تجميع خمسون عينة من جمال مصابة بأعراض تشبه الجدرى خلال الفترة من 2017 الى 2020 وذلك لتقييم إختبار تفاعل بلمرة متسلسل ثنائى حقيقى الوقت بالمقارنة مع إختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدى للكشف عن فيروسات الجدرى فى هذه العينات.
- وجد ان الحساسية التشخيصية لإيجابية العينات وصلت الى 66% باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدى ولكن مع إختبار تفاعل بلمرة متسلسل ثنائى حقيقى الوقت كانت 86 % بالإضافة الى الكشف عن حالة اصابة مزدوجة بجدرى وإكزيما الجمال بكلا الإختبارين.
- هذه النتائج تثبت أن إختبار تفاعل البلمرة المتسلسل ثنائى حقيقى الوقت أكثر حساسية من إختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدى ويساعد فى تجنب النتائج السلبية المزيفة او غير الحقيقية.
- تشخيص هذه الأمراض سيكون اسرع باستخدام هذه الاختبارات خاصة انها تعددية وبالتالى ستزيد السعة التشخيصية للمعامل ولن توفر فى الوقت فقط بل فى التكلفة والمجهود ايضا.