الفهرس 
INTRODUCTIONOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 148 |  |  |
| | | from | 148 | | |
Abstract
على مدى عقود كان ولايزال مرض الحمى القلاعية يمثل مشكلة خطيرة في مصر بسبب إستوطان أنماط مصليه مختلفه منه والتى تنتشر داخل البلد وتغزوها من البلدان المحيطة. يوجد سبعة أنماط مصلية لفيروس الحمى القلاعية تسمى (O, A, C, Asia1, SAT1, SAT 2, and SAT 3). وكان النمط المصلى A هو المتسبب فى تفشى المرض بشكل خطير عام 2006 بينما النمط المصلى SAT2 كان المتسبب فى تفشى المرض عام 2012 حيث تسبب تقريباً فى إصابه كل الحيوانات والوفاه لحوالى 20% منها. ونتيجة تفاقم الوضع وعدم وجود أعراض ظاهريه للإصابه خاصه بكل نوع نمطى من الفيروس يجعل من التشخيص الدقيق للفيروس على نطاق واسع أمراً مستحيلاً. وتعتبر الأجسام المضاده عديده النسل من أقوى الأدوات المستخدمة فى والتشخيص وأيضاً تعتبر من أسرعها نمواً وتطوراً. أصبح إستخدام الأجسام المضاده عديده النسل المعاد إتحادها بديلاً تشخيصيا أكثر إنتشاراً مقارنةً بالأجسام الكاملة الطول بسبب صغر حجمها ورخص إنتاجها من الناحيه الإقتصاديه إلى جانب القدره على إكثارها الوراثى. يعتبر الهدف الرئيسى لهذه الدراسة هو التعبير الجينى لجين الغطاء البروتينى (VP2) لفيروس الحمى القلاعية والحصول على البروتين المعبر عنه في صوره قابله للذوبان وبمستوى جيد من الناحيه التركيبيه والإلتفاف، بالإضافه إلى إنتاج الأجسام المضادة عديدة النسل بعد حقن البروتين الناتج فى الارانب.
وذلك تحقق عن طريق :
1) تم عمل تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للكشف عن جين VP2 الذى تم تخليقه وذلك بإستخدام بادئ خاص بالجين المعني وذلك لمعرفة والتاكد من حجم الجين، وعن طريق الهجرة الإلكترونية للقطع الجينية الناتجة مقابل معيار قياسى من ال DNA (ladder) تم إثبات أن حجمها يقارب 591 نيوكليوتيده.
2) تم الحصول على الجين من الهلام فى صورة نقية ثم استنساخ هذه القطعة الجينية فى الناقل PGEM-T- easy vector وذلك للحصول على صورة جديدة من معاد الاتحاد وقد اعيد تسميتة POR1 وذلك لحقنه داخل E. Coli GC5 كاداه حيوية لإتمام عملية الاستنساخ.
3) ايضا، تم إنبات الـ E. coli GC5 المعدلة وراثيا على بيئه غذائيه مناسبه وبعد انقضاء فترة التحضين تم اختيار المستعمرات البكتيرية ذات اللون الابيض والتى من عملية الترجمة هو البروتين الخاص بالبروتين VP2 ولكنه مرتبط بشق بروتيني آخر خاص بال GST .
8) تم التخلص من الشق البروتينى الخاص بـ GST بإستخدام الثرومبين والذى يساعد بدوره فى تحرر البروتين موضع الدراسة وقد اجريت هذه التجربة عند درجة حرارة 22 درجة مئوية لمدة 16 ساعة، وبالمثل تم التاكد من البروتين المتحرر كماً وكيفاً باستخدام التقنيتين السابق ذكرهما.
9) تم حقن ارانب نوع نيوزلاند بجرعة من البروتين المعدل المنقى (1 مللي جرام ) اربعة مرات على مدار خمسة اسابيع على التوالى لإنتاج أجسام مضادة متعددة النسائل(Polyclonal Antibody).
10) تم عمل لطخة غربية (Western blot ) باستخدام الأجسام المضادة المنتجة سابقا فى الارانب للتأكد من تخصصية الاجسام المضادة متعددة النسائل المنتجة فى الارانب ، وقد تبين كفاءة وقوة التفاعل بين الأجسام المضادة المنتجة فى الارانب وبين البروتين المعدل بظهور لون بنفسجى غامق
11) تم فصل المصل المحتوى على أجسام مضادة متعددة النسائل وتنقيته وتركيزه الى 1.0 مللى جرام لكل مللى وتم تحديد العيار له مع البروتين المعدل ، وكانت النتيجة الوصول الى العيار 1 ميكرولتر من المصل مقابل 64000 مللى من المحلول المنظم.
12) تم عمل إليزا Indirect-DAS- ELISA بإستخدام الاجسام المضادة المنتجة فى الارانب والمضاده للبروتين VP2 ، وبمقارنة قيم الاليزا المتحصل عليها المضادة المعيارية مما يؤكد كفاءة الأجسام المضادة المنتجة فى الارانب والتى تفاعلت بكفاءه مع كلا من العترات A,O,SAT2 . الموجوده فى مصر .
أظهرت الاختبارات المطورة تخصصية عالية حيث استطاعت التفاعل بقوه مع الثلاث عترات الموجوده فى مصر من فيروس الحمى القلاعية بدقة وتخصصيه عاليه.