الفهرس 
INTRODUCTIONOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 131 |  |  |
| | | from | 131 | | |
Abstract
أجريت هذه الدراسة علي عدد خمسة وثلاثين من إناث الجاموس المصري من قطيع نواة الجاموس المحفوظ في محطة النطاف الجديد و مزرعة محلة موسى، معهد بحوث الإنتاج الحيواني، مركز البحوث الزراعية، وزارة الزراعة.وقد تمت الدراسة بالمعمل المركزي بكلية الطب البيطري ، جامعة بنها، مصر خلال الفترة من 2015 الي 2017. وكان عدد العينات 5 طبيعية ، 14 عديمة الشياع و 16 ذو شياع متكرر. تم إجراء هذه الدراسة لعزل وتحديد الطفرات الجينية والاختلاف في جينات بي ام بي (بي ام بي 4 (اكسون 2و جزء من انترون 2)، بي ام بي 7 )جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2 ( وبي ام بي7(اكسون 6) و بي ام بي 7 (جزء من انترون 6 و جزء من اكسون 7)).-جمعت عينات الدم على إدتا وتم استخراج الحمض النووي الجيني (DNA)، تم عزل جينات بي ام بي باستخدام تقنية تفاعل انزيم البلمرة المتسلسل (PCR)، ثم عمل تتابع نيوكلوتيدي لشريط الحامض النووي لكل جين لاكتشاف الطفرات الموضعية SNP)) واستخدام تقنية اختلاف أطوال تقطيع الشريط الوراثي(PCR-RFLP).
1-تقنية تفاعل انزيم البلمرة المتسلسل (PCR):أجريت هذه التقنية لخمسة وثلاثين عينة باستخدام أربع أزواج من البوادئ: (بي ام بي4 (BMP4) اكسون 2 بالإضافة إلى جزء من انترون2 ،482 قاعدة نيتروجينية)، بي ام بي7 (BMP7) )جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2 ، 332 قاعده نيتروجينية) ، بي ام بي7 (BMP7) اكسون 6، 259 قاعده نيتروجينية) و بي ام بي 7(BMP7) جزء من إنترون 6 بالإضافة إلى جزء من اكسون 7) ثم تصويرها على هلام الاغاروز 2٪.2-الكشف عن الاختلاف وتحديد الطفرات الجينية: 2.1. (بي ام بي 4 (BMP 4) اكسون 2 بالإضافة إلى جزء من انترون 2،482 قاعدة نيتروجينية):تم عمل تتابع نيوكلوتيدي لشريط الحامض النووي ، والتي تبين 99٪ تماثل مع الجاموس ((Babulus babulis و 99٪ مع الابقار (Bos taurus) وقد نتجت تتابعات مشتركة من جميع المجموعات ولم يتم العثور على أي تغيير. نستنتج من هذا أن جين بي ام بي4 BMP 4)) هو واحد من أفضل الجينات التطورية المحفاظ عليها. كما تم اكتشاف طفرة موضعية (C387T) في الموقع 387 بالمقارنة مع الأبقار وقد يرتبط هذا التغير بالتطور بين الجاموس والابقار ويمكن استخدامها بوصفها لتمييز الأنواع / تحديد الهوية.-كما تم عمل تقنية اختلاف أطوال تقطيع الشريط النووي (PCR- RFLP): وذلك باستخدام انزيمي القطع Taqα1 وHinf1. تم تقطيع 482 قاعدة نيتروجينية باستخدام Taqα1 الي شظايا 270 و 212 قاعدة نيتروجينية في جميع العينات. في حين استخدام Hinf1 أعطي شظايا 279 و 157 و46 قاعدة نيتروجينية في جميع العينات ولهم نفس الطرز الجيني .AA وهذا يتفق مع نتيجة تسلسل التتابع الجينى على أن بي ام بي4 (BMP 4) هو واحد من أفضل العوامل التطورية المحفاظ عليها.2.2. بي ام بي7 (BMP 7 ) )جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2 ، 332 قاعدة نيتروجينية:نتج عن تسلسل النيوكليوتيدات للجين بي ام بي7 (BMP 7 ))جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2 ، 100٪ تماثل مع الجاموس (Babulus babulis) و 99٪ تماثل مع الابقار. ولم يلاحظ أي تباين بين الحيوانات المختبرة. ثم تم إجراء التقطيع الجيني للعينات باستخدام انزيم MSP1 نتج عنه شظايا 142و 84و 75 و 31 قاعدة نيتروجينية في جميع العينات ونفس الطرز الجينى AA، وهذه النتيجة مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها عن طريق التسلسل النيوكليوتيدي.2.3. بي ام بي7 (BMP 7 ) إكسون 6، 259 قاعدة نيتروجينية:نتج عن تسلسل النيوكليوتيدات للجين بي ام بي7 (BMP 7 ) إكسون 6 100٪ تماثل مع الجاموس (Babulus babulis) و 97٪ تماثل مع الابقار. ولم يلاحظ أي تباين بين الحيوانات المختبرة. ثم تم إجراء التقطيع الجيني للعينات باستخدام انزيم MSP1 نتج عنه شظايا 195 و 64 قاعدة نيتروجينية في جميع العينات ونفس الطرز الجينى AA، وهذه النتيجة مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها عن طريق التسلسل النيوكليوتيدي. وهذا يدل على هيكل بي ام بي 7 المحافظ.2.4. بي ام بي7 (BMP 7 ) (جزء من إنترون 6 بالإضافة إلى جزء من اكسون 7، 360 قاعدة نيتروجينية:نتج عن تسلسل الحمض النووي إلى وجود 98 ٪ تماثل مع الابقار و 99٪ تماثل مع الجاموس (Babulus babulis) وذلك في بعض الحيوانات الذين يعانون من قلة الخصوبة، كما تم اكتشاف طفرة موضعية (G / A) في قاعدة 82 من بداية اكسون 7 من الجين بي ام بي7 (BMP 7 )، وهى طفرة غير متجانسة مما تسبب تغير الحمض الأميني (أسبارتات) إلى الحمض الأميني أسباراجين. وتم اجراء التقطيع الجيني للعينات باستخدام انزيمي التقطيع Hinf1 و Taqα1 فأعطى باستخدام Hinf1 شظايا 192 و 93 و 75 قاعدة نيتروجينية في جميع العينات مع نفس الطرز الجيني AA . أما باستخدام انزيم Taqα1 أعطي شظايا 210 و 103 و 47 قاعدة نيتروجينية للطرز الجينى AA بنسبة حدوث 94 % وشظايا 360، 210، 103 و 47 قاعدة نيتروجينية للطرز الجينى AB بنسبة حدوث .06%0.الخلاصة:•لم يتم العثور على أي طفرة في جين بي ام بي 4 (BMP 4) اكسون 2بالاضافة الي جزء من انترون 2) وبي ام بي 7 (BMP 7) )جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2) وبي ام بي 7 (BMP 7) اكسون 6.•يعتبر بي ام بي4 (BMP 4) و بي ام بي (BMP 7) من أفضل الجينات التطورية المحافظ عليها للغاية بين الابقار والجاموس.•لوحظ وجود طفرة موضعية (G / A) في قاعدة 82 من بداية اكسون 7 من الجين (BMP 7)، وهى طفرة غير متجانسة مما تسبب تغير الحمض الأميني (أسبارتات) إلى الحمض الأميني أسباراجين، والتي يمكن أن يكون لها علاقة بالمشاكل التناسلية في الجاموس المصري. لذا فإن تحليل الواسمات المميزة للجين BMP 7 يمكن أن يطبق بكفاءة في الانتقاء وتحسين الكقاءة التناسلية لدي الجاموس المصري.وبالنسبة لاختلاف أطوال تقطيع الشريط الوراثي (PCR-RFLP) تم استنتاج الاتى:•لا يوجد اي اختلاف في جين بي ام بي 4 (BMP 4) اكسون 2بالاضافة الي جزء من انترون 2) باستخدام انزيمي القطع Hinf1وTaqα1 بين الحيوانات الطبيعية والتى تعانى من قلة الخصوبة.•كذلك لا يوجد اي تباين بين الحيوانات الطبيعية والتى تعانى من قلة الخصوبة في جينى بي ام بي 7 (BMP 7) )جزء من انترون1 واكسون 2 وجزء من انترون 2) وبي ام بي 7 (BMP 7) اكسون 6 باستخدام إنزيم القطع 1MSPو جين بي ام بي7 (BMP 7 ) (جزء من إنترون 6 بالإضافة إلى جزء من اكسون 7) باستخدام انزيم القطع Hinf1.•في حالة استخدام انزيم القطع Taqα1 نتج نوعين من الطرز الجينى: AA في الحيوانات الطبيعية بنسبة حدوث 94 % و الطرز الجينى AB في بعض الحيوانات التى تعانى من قلة الخصوبة بنسبة حدوث0.06%.