الفهرس 
ReviewOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 114 |  |  |
| | | from | 114 | | |
Abstract
1- تجميع السائل المنوي:تم تجميع السائل المنوي من خمس طلائق تخص مزرعة معهد بحوث التناسليات الحيوانية بالهرم التابع لمركز البحوث الزراعية بوزارة الزراعة بواسطة المهبل الصناعي أسبوعيا وتم تقييم السائل المنوي مبدئيا اعتمادا على التركيز ، الحركة الفردية لتقدير معدل التخفيف .العينات التي أحتوت على 70% حركة فردية ، 80 % شكل طبيعي للحيوان المنوي تم استخدامها في الدراسة.
2- تجميد وتجفيف السائل المنوي)التجفيد (:- تم خلط عينات السائل المنوي من الطلائق لتجنب الإختلافات الفردية والحصول على قدر كافي من السائل المنوي .ثم تم تقسيم السائل المنوي الى جزئين :
•الجزء الاول تم فيه تجميد السائل المنوي بإستخدام مخفف تريس حامض الستريك والفركتوز ويتكون من (تريس 02, 3 جرام/100 مل، حامض الستريك 67,1 جرام / 100مل ، فركتوز25,1 جرام/100مل، صفار بيض 20% (حجم/حجم) ، جلسرول4,6 % (حجم/حجم)، بنسلين 1000 وحدة / مل وستربتوميسين 100 ميكروجرام/مل) بتركيز نهائي 30 ×610 / 5,0 مل ثم بعد الإذابة تم فصل البلازما منه بإستخدام أحد الطريقتين (parrish et al., 1995) :
1-Swim up method
تم فيها تغطية 25,. مل من السائل المنوي ب 1 مل Sp-TALP في انابيب 5,1 مل لمدة ساعة عند درجة 39 مئوية ثم تم تخفيف أول 85,. مل من كل انبوبة بـ 5 مل Sp-TALPوبعد 10 دقائق في جهاز الطرد المركزي عند1200لفة مرتين تم تخفيف العينة بمخففات التجفيد المستخدمة في الدراسة بتركيز نهائي 10-25 ×610/ مل.
2-Percoll gradient (45-90%)
عند 3000 لفة تم فصل البلازما لمدة20دقيقة وبعد ازالة البلازما تم تخفيف العينة بمخففات التجفيد المستخدمة في الدراسة بتركيز نهائي 10-25 × 106/ مل.
•الجزء الثاني تم تجفيده مباشرة باستخدام المخففات الأربعة المستخدمة في الدراسة.
المخففات المستخدمة في التجميد المجفف :
أ-Tris-EGTA يتكون من (10 مل مول تريس هيدروكلورايد ، 50 مل مول EGTA ، 50 مل مول كلوريد الصوديوم مع ضبط الأس الهيدروجيني عند 0,8 (.
ب-Tris-EDTA يتكون من (10 مل مول تريس و1 مل مول EDTA مع ضبط الأس الهيدروجيني عند 0,8 (.
ت-TCM 199) TCM مزودة بـ 10 % (حجم / حجم) (fetal calf serum.
ث-TCM 199) TCM-Trehalose مزودة بـ 10 % (حجم / حجم) fetal calf serum و2,. مول/ لتر من التريهالوز(.
تمت التعبئة في انابيب 5,1 مل عند درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة ثم بعد ذلك تم تعريض الانابيب لبخار النيتروجين السائل من على بعد 5 سم لمدة ساعة (تقريبا عند -80 درجة مئوية) وأخيرا تم غمس الانابيب في النيتروجين السائل (LN2) عند (-196) بعمق 1 سم لمدة 20 ثانية .
بمجرد التجميد تم وضع الانابيب في جهاز التجفيد المبرمج عند (-55 درجة مئوية) و ضغط 10- 3مل بار، وبعد 24 ساعة تم حفظ الانابيب في ورق الالومنيوم لمدة 3 شهور عند4،-20و-80 درجة مئوية.
3- الإسالة :-
تمت إعادة إسالة العينات بإضافة 100 ميكروليتر milli-Q water في درجة حرارة الغرفة.
4- تقييم السائل المنوي :
تم تقييم السائل المنوي لكل مخفف ودرجة حفظ على حدة من خلال تقييم الحركة الفردية للسائل المنوي، نسبة الحيوانات المنوية الغير طبيعية ، نسبة الحيوانات المنوية الحية، سلامة جدار الحيوانات المنوية، سلامة الاكروزوم التركيب الكروماتيني للحيوانات المنوية، التركيب الدقيق للحيوانات المنوية تحت الميكروسكوب الإلكتروني وأخيرا الإخصاب المجهري بعد التجميد المجفف .
الخلاصة
من النتائج يمكن استنتاج مايلي :
1-يمكن استخدام طريقة الحفظ بالتجميد المجفف كطريقة بديلة لطرق الحفظ التقليدية الأخري للسائل المنوي لطلائق الجاموس.
2-طريقة الحفظ بالتجميد المجفف تتغلب على مشكلة توفير النيتروجين السائل المستخدم في حفظ السائل المنوي لطلائق الجاموس بالتجميد.
3-بالرغم من عدم قدرة الحيوانات المنوية على الحركة وتأثر الجدار الخلوي بعد التجميد المخفف إلا أن الحامض النووي والاكروزوم تم الحفاظ عليهم بشكل كبير بعد التجميد المجفف.
4-استخدام مخفف الـTCM عند درجة الحفظ 4 درجة مئوية ومخفف التجميد المجفف الذي يحتوي على الـEGTAعند درجة حفظ -20 والمخفف الذي يحتوي على الـEDTA درجة الحفظ -80 درجة مئوية للحصول على أقل نسبة تكسيرللحامض النووي الخاص بالحيوان المنوي الجاموسي.
5-استخدام مخفف التجميد المجفف الذي يحتوي على الـEDTA ومخفف الـTCMبدون إضافة سكر التريهالوز يؤدي الى عدم تناسق الانيبيبات الدقيقة داخل الحيوانات المنوية.
6-استخدام الحيوانات المنوية التي سبق تجفيدها في مخفف الـTCMبدون تريهالوز في الإخصاب المجهري يعطي نتائج عالية في مراحل النمو الجنيني.
7-استخدام الحيوانات المنوية التي سبق تجفيدها في مخففات الـTris-EGTA والـTris-EDTA في الإخصاب المجهري يعطي نتائج منخفضة في مراحل النمو الجنيني.